猪elisa试剂盒操作中的注意事项说明：

　　1、使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

　　2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

　　3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

　　4、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　5、每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

　　6、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　7、每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

　　8、取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

　　9、在450nm波长处测定各孔的OD值。

　　对于含多个抗原决定簇的大分子蛋白，使用双抗体夹心模式测定相当简便，猪elisa试剂盒采用此种测定模式。具体测定方法如下：

　　1．首先以双抗体之一于碳酸盐缓冲液中4℃下放置一个晚上包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗体，洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未结合的部分及杂质。

　　2．加入含待测物的临床样本如血清等，温育一定时间后洗板；此时，待测抗原就会与固相上特异抗体反应而吸附于固相上。

　　3．加入酶标记的双抗体之二，温育一定时间后洗板；此时，在固相上即形成双抗体与特异抗原的夹心产物。

　　4．加入酶底物，温育显色测定。