免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液

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免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液

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上海康朗生物科技有限公司

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详细信息

免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解 产品描述

本品细胞/组织裂解液,WB/IP裂解液,是一种非变性条件下的裂解液,含有sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、sodium orthovanadate和leupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解,并能维持原有的蛋白间的相互作用。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP和Co-IP等实验。

免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解 运输与保存方法

冰袋(wet ice)运输。

-20℃保存,一年有效。尽量避免反复冻融,建议分装后使用。

免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解 注意事项

1)需自备PMSF。

2)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

3) 用WB/IP裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度(YEASEN CAT NO.20201ES76)。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解 使用说明:

(一) 细胞样品

1)融解WB/IP裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的zui终浓度为1mM。

2)贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。

悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成5×105~1×106个细胞/管,然后再裂解。因为大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

3)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。

(二)组织样品:

1)把*切成细小的碎片。

2)融解WB/IP裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的zui终浓度为1mM。

3)按照每20mg组织加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

5)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,
kl-12639R BSPRYBSPRY蛋白抗体 【性 状】: Lyophilized or Liquid【浓 度】: 1mg/1ml
kl-13684R BAIAP2L2BAIAP2L2蛋白抗体 【性 状】: Lyophilized or Liquid【浓 度】: 1mg/1ml
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kl-0248R BDNF脑源神经营养因子抗体 【性 状】: Lyophilized or Liquid【浓 度】: 1mg/1ml
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kl-1015R BRMS-1乳腺癌转移抑制基因1抗体 【性 状】: Lyophilized or Liquid【浓 度】: 1mg/1ml
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