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Anti-OCEL1抗体,紧密连接蛋白/小分子胶原蛋白OCEL1抗体价格
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代理商微蒙生物这一品牌从成立之初一直关注酶联免疫领域,免疫组化和流式等领域,经过了数年的发展,已成为这一领域的老牌供应商,并得到了用户的*认可。
微蒙生物科技(上海)有限公司是一家专门从事生物技术相关产品研发和销售的综合性生物科学公司。主要经营ELISA试剂盒、细胞、血清、抗体、金标试剂盒、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗、毒素、移液器等产品,产品国内大部分地区。公司专注于高品质抗体资源的整合和研发,致力于以高水平的专业服务,积极推动中国生物产业和市场的发展。 微蒙生物科技(上海)有限公司的产品应用领域涵盖科学研究、生物技术、环境测试、色谱分析、药物研发、质量检验、教育实验和精细化工,现经营“沪试”、“沃凯”、“京试”、“进口”等品牌。公司拥有自营进出口权,国外的也将微蒙化试视为可靠的、有价值的合作伙伴。
重要提示: Anti-OCEL1抗体,紧密连接蛋白/小分子胶原蛋白OCEL1抗体价格,本产品仅供研究使用,不用于人类治疗或诊断.
详细信息如下:
【浓 度】:1mg/1ml
【抗体来源】:Rabbit or Mouse or Goat(咨询或)
【克隆类型】:polyclonal or monoclonal
【产品类型】:一抗
【性 状】:Lyophilized or Liquid
【亚 型】:IgG
【纯化方法】:affinity purified by Protein A
【储 存 液】:0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
【保存条件】: Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
【应用领域】: Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等,具体适用的实验请,本公司有同一产品适用于不同实验的抗体。
Anti-OCEL1抗体,紧密连接蛋白/小分子胶原蛋白OCEL1抗体价格应用于WB实验时的操作方法:蛋白提样品制备
1、 将培养液吸入至15 ml离心管中,于2500 rpm离心5 min。
2、 弃上清,加入5 ml PBS并用枪轻轻吹打洗涤,然后2500 rpm离心5 min。弃上清后用PBS重复洗涤一次。
3、 用枪吸干上清后,加100 μl裂解液(含PMSF)冰上裂解30 min,裂解过程中要经常弹一弹以使细胞充分裂解。
4、将裂解液4℃、12000 rpm离心5 min,取上清分装于0.5 ml EP管中并置于-20℃保存。
5、BCA法测蛋白浓度
SDS-PAGE电泳
1、 玻璃板对齐后放入夹中卡紧,然后垂直卡在架子上准备灌胶。
2、按前面方法配10%分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时,可用10 ml枪吸取5 ml胶沿玻璃放出,待胶面升到绿带中间线高度时即可。然后胶上加一层水,液封后的胶凝的更快。(灌胶时开始可快一些,胶面快到所需高度时要放慢速度。操作时胶一定要沿玻璃板流下,这样胶中才不会有气泡。加水液封时要慢,否则胶会被冲变型。)
3、 当水和胶之间有一条折射线时,说明胶已凝了。再等3 min使胶充分凝固就可倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。
4、 按方法配4%的浓缩胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶后将梳子插入孔槽。灌胶时也要使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。插梳子时要使梳子保持水平。待到浓缩胶凝固后,两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。
5、 用水冲洗浓缩胶,将其放入电泳槽中。
6、 测完蛋白含量后,计算含20-50 μg蛋白(根据自己的实验需要进行选择,没有固定的量)的溶液体积即为上样量。取出上样样品至200 μl的EP管中,加入5×SDS 上样缓冲液至终浓度为1×。上样前要将样品于沸水中煮5-10 min使蛋白变性。
7、 加入足够的电泳缓冲液后开始准备上样。(电泳液至少要漫过内测的小玻璃板。)用微量进样器贴壁吸取样品,将样品吸出不要吸进气泡。将加样器针头插至加样孔中缓慢加入样品(包括一孔做可视的蛋白marker)。(加样太快可使样品冲出加样孔,若有气泡也可能使样品溢出。加入下一个样品时,进样器需在外槽电泳缓冲液中洗涤数次,以免交叉污染)
8、电泳:浓缩胶时用80-100 V跑,到分离胶以后用150-200 V跑,总时间2 h左右,电泳至溴酚兰刚跑出即可终止电泳,进行转膜。
转膜
1、 转一张膜需准备6张7.0~8.3 cm的滤纸和1张7.3~8.6 cm的NC膜。切滤纸和膜时一定要戴手套,因为手上的蛋白会污染膜。将切好的硝酸纤维素膜置于甲醇液中浸泡后使用。
2、在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支玻棒、滤纸和浸过的膜。 将夹子打开使黑的一面保持水平。在上面垫一张海绵垫,用玻棒赶走气泡。在垫子上垫三层滤纸。
3、将玻璃板轻轻撬开后剥胶,除去小玻璃板后,将浓缩胶轻轻刮去。小心剥下分离胶盖于滤纸上,用手调整使其与滤纸对齐,轻轻用玻棒擀去气泡。将膜盖于胶上,要盖满整个胶(膜盖下后不可再移动)并除气泡。在膜上盖3张滤纸并除去气泡。zui后盖另一个海绵垫,合起夹子。整个操作在转移液中进行,要不断的擀去气泡。膜两边的滤纸不能相互接触,接触后会发生短路。
4、将夹子放入转移槽槽中,使夹的黑面对槽的黑面,夹的白面对槽的红面。电转移时会产热,在槽的一边放一块冰来降温。一般用60 V转移2 h或40 V转移3 h。
免疫反应
1、将膜用TBS从下向上浸湿后,移至含有封闭液的平皿中,室温下脱色摇床上摇动封闭1 h。
2、将一抗用TBST稀释至适当浓度(在1.5 ml离心管中);将膜涂满一抗溶液后置于湿盒中,4℃孵育过夜,用TBST在室温下脱色摇床上洗两次,每次10 min;再用TBS洗一次,10 min。
3、同上方法准备二抗稀释液并与膜接触,室温下孵育1~2 h后,用TBST在室温下脱色摇床上洗两次,每次10 min;再用TBS洗一次,10 min,进行化学发光反应。
化学发光,显影,定影
将A和B两种试剂在保鲜膜上等体积混合;1 min后,将膜蛋白面朝下与此混合液充分接触;1 min后,将膜移至另一保鲜膜上,去尽残液,包好,放入X-光片夹中,曝光相应时间。冲洗胶片。
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