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关于我们
上海信帆生物科技有限公司（Shanghai Xinfan Biotechnology Co.,Ltd）成立于上海，是一家集“产品研发、销售、技术服务"为一体的生物公司。经过多年的努力发展已成为专业供应各类生物科研用品的公司，长期专注于生物领域，旗下代理产品种类众多。信帆生物秉承以产品质量为根本，以市场需求为导向，以为客户创造价值为己任的精神，坚守产品质量的可靠、稳定，并严格秉承“专业、诚实、守信、创新"全过程、多方位的质量监控检测，从包装到品质，从产品到服务，每个环节，我们都严控质量关，力求为客户提供更好的、更专业性的技术服务和科研产品。我们供应的产品包括elisa试剂盒，生化试剂盒，动物血制品，抗体，质控品，干扰物质，抗原，生化试剂，实验耗材等10万余种类，公司长期致力于为客户提供RT-PCR检测、病理染色、免疫组化检测、Western blotting检测、生化检测、ELISA检测、放免检测等一系列实验代测服务。产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学的各个领域。
主营业务
主营产品: 质控品，干扰物质，抗体抗原，elisa试剂盒，动物血制品，生化试剂盒等。实验代做服务：HE染色/特殊染色/技术服务、免疫组化实验服务、Western blotting实验服务、RT-PCR实验技术服务,QPCR(荧光定量PCR）、酶联免疫ELISA、生化测试、液相气相检测、RACE、全基因合成、线粒体测序、基因克隆、定点突变、染色体步移、基因组全序列获取、环境微生物多样性、微生物基因组测序、微生物菌种鉴定、甲基化分析服务等。经销品牌：Abcam、Sigma、CST、Amresco、BD、Enzo、Bio-Rad、merck、Santa Cruz、Jackson、R&D、Merck Millipore、gibco、hyclone、Bio-World、NEB、Tocris、Corning、Axygen等等。
核心价值
公司本着以专业的产品、合理的价格、完善的服务，为客户提供更好的，更专业的技术服务和科研产品。公司以“质量为重，专业服务"的原则，致力于为用户提供高性价比的试剂盒和检测服务，提供全程咨询和技术支持，包括确定测定指标、选择合适的试剂盒规格、试剂盒保存、预测定和测定结果分析等。高质量的产品，让用户省心；专业的检测服务，让用户省力；优惠的价格，让用户省钱。信帆生物为广大用户提供各类检测服务，帮助老师轻松获得了真实可靠的检测数据，显著提高了用户的科研效率，为其发表高水平的研究论文提供了坚实的平台；为研究生按时毕业，导师顺利结题、申请新课题和晋升职称提供了实实在在的帮助，公司客户遍布国内各大学、医院、研究所、卫生防疫、生物公司等单位。
详细信息
所有产品仅供科研使用，不能用于食用和医疗等
real-time PCR实验检测
Real-Time PCR 技术，又称实时定量荧光PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量。
服务说明
荧光定量PCR实验步骤
1、总RNA抽提（枪头和离心管均经过湿热灭菌，无RNA酶）
1）取匀浆器，加入1ml的Trizol Reagent，置冰上预冷。
2）取100mg组织，加入到匀浆器中。
3）充分研磨直至无可见组织块。
4）13000g离心10min取上清。
5）加入250 μl，颠倒离心管15s，充分混匀，静置3min。
6）4℃下13000g离心8min。
7）将上清转移到一新的离心管中，加入0.8倍体积的异丙醇，颠倒混匀。
8）-20℃放置15min。
9）4℃下13000g离心10min，管底的白色沉淀即为RNA。
10）吸除液体，加入75%乙醇1.5ml洗涤沉淀。
11）4℃下13000g离心5min。
12）将液体吸除干净，将离心管置于超净台上吹3min。
13）加入20μl无RNA酶的水溶解RNA。
14）55℃孵育5min。
2、反转录（枪头和PCR均经过湿热灭菌，无RNA酶）
1）取一PCR管，加入含2μg RNA的溶液。
2）加入1μl oligo(dT)15。
3）用无核糖核酸酶的去离子水补足至12μl。
4）于PCR仪上70℃保温5min，迅速置冰上冷却。
5）依次加入4μl 5×buffer，2μl 10mM dNTPs，1μl RNA inhibitor和1μl 反转录酶，用枪抽吸混匀。
6）于PCR仪上42℃保温60min，结束后80℃保温5min灭活反转录酶。
3、定量PCR
1）取0.2ml PCR管，配制如下反应体系，每个反转录产物配制3管。
2× qPCR Mix 12.5μl
7.5μM基因引物 2.0μl
反转录产物 2.5μl
ddH2O 8.0μl
2）取0.2ml PCR管，配制如下反应体系，每个反转录产物配制3管。
2×qPCR Mix 12.5μl
7.5μM内参引物 2.0μl
反转录产物 2.5μl
ddH2O 8.0μl
3）PCR扩增
预变性 95℃，10min
循环（40次） 95℃，15s→60℃，60s
溶解曲线 75℃→95℃，每20s升温1℃
4、结果处理
ΔΔCT法：
A=CT(目的基因，待测样本)- CT(内标基因，待测样本)
B=CT(目的基因，对照样本)- CT(内标基因，对照样本)
K=A-B
表达倍数=2-K
real-time PCR实验检测
注意事项
1、长度：15—30bp。
2、G十c含量：应在40%一60%之间。
3、碱基分布的随机性
4、引物自身：不要含有自身互补序列，否则会形成发夹样二级结构。
5、引物之间：两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体，尤应避免3’端的互补重叠。
6、上下游引物的互补性：一个引物的3‘末端序列不允许结合到另一个引物的任何位点上。
7、3’末端：如果可能的话，每个引物的3‘末端碱基应为G或C。
8、设计RT-PCR的引物时，上下游引物要跨内含子，以消除基因组DNA的干扰。
9、引物设计好后再NCBI上进行序列比对，检查是否可能有错配产物扩增。
10、引物设计要注意种属。
