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细胞流式检测
中级会员第5年
伊莱博生物科技(上海)有限公司(简称,伊莱博生物),总部位于上海市长江软件园,2024年1月与上海大学医学院成立联合研究中心,是一家以生命科学研究为基础,专注于研究成果转化及技术服务的创新型高科技企业。主要致力于为科研人员及机构提供专业的技术团队和实验平台,建立包含肿瘤生物学、病理学、免疫学、细胞生物学、生物化学与分子生物学和动物实验等学科的研究服务体系。
伊莱博生物拥有丰富的研究经验,具备完善的系统化管理能力和科研服务体系。目前已自建细胞、分子、病理等实验平台近1000平方米,拥有的仪器设备、细胞库、样本保存库等。动物实验中心近1800平方米,可满足同时饲养清洁级和SPF级动物。核心实验技术团队主要来自中国科学院大学、复旦大学、上海交通大学等重点高校及科研机构,能够为客户提供研究方案策划、项目实施及项目深度分析等方面的技术支持。公司目前参与研究项目已经涵盖心脑血管、肿瘤、内分泌、生殖、免疫、神经等诸多领域。
为了响应大力发展基础研究的号召,推动生命科学领域的进步,伊莱博生物充分利用积累多年的科研资源优势,提供培训服务。通过实验理论培训和实践相结合,充分了解科学研究和实验操作的全过程,培训规范的实验操作、分析问题和解决问题的能力,分层次培养科研人才,为其今后的科研工作奠定坚实的基础。
因为专业,所以值得信赖;因为专注,所以高速发展;坚持“诚信创新,互利共赢”的原则;朝着“解决科研问题”这一目标,伊莱博人将通过自身的努力,与一线科研人员共同推动生命科学的快速发展!
细胞流式检测流式细胞术(FlowCytometry,FCM):
就是对在高速流动的鞘液包裹下的细胞、粒子进行分析和分选的技术,这种细胞或粒子是经过特异荧光标记的。其特点是测量速度快,每秒钟能测数千个乃至上万个细胞,且可进行多参数测量,另一特点是在分析的同时可把具有特征的细胞分离出来,这就是分选技术。
重要参数:前向角散射(FSC):前向角散射光的强度与细胞的大小有关,也就是说,同一个细胞群体,FSC强的,其细胞大一些,而FSC弱的,其细胞小一些。侧向角散射(SSC):侧向角散射又称90°散射或大角散射。侧向角散射光对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感,对胞内较大的颗粒也会有反应。所以,侧向角散射光的强弱可反应细胞内精细结构和颗粒的性质。荧光信号(FL):是细胞或细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光,不同的荧光染料其发射波长不同。通过荧光强度可将同一个细胞群体中的有荧光标记的细胞与无荧光标记的细胞区分开来,也就是我们通常所说的阳性细胞,也可以将阳性细胞中的高FL的细胞与低FL的细胞区分开来,也就是可以把强阳性细胞和弱阳性细胞区分开来。一般的流式细胞仪只装有一个激光光源(488nm),可测出三个FL,即FL1、FL2、FL3。FL2-W指检测荧光的脉冲宽度,区分单个细胞和双联体细胞FL2-H指脉冲高度,细胞单位面积上的荧光浓度FL2-A指脉冲面积,即细胞荧光总和。
细胞流式检测周期检测:
细胞内的DNA含量随着细胞周期进程发生周期性变化。利用PI标记的方法,通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定,可分析细胞周期各时相的百分比,反映细胞的增殖状态和非二倍体(异倍体)的DNA含量。其中PI可以与细胞内DNA和RNA结合,采用RNA抑制剂将RNA消化后,通过流式细胞术检测与DNA结合的PI的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。
细胞增殖检测
示踪染料标记法:示踪染料能与细胞发生非特异性的稳定结合,主要有两种结合方式:进入胞内与蛋白质共价结合,如CFSE和BRSE;嵌入细胞膜的磷脂双分子层,与细胞非公价结合,如PKH类和CellVue类等。CFSE是活细胞染料,又称 CFDA-SE或 CFDA,其标记细胞后对细胞毒性小,被激发后能发出很强荧光,且非常稳定,只有当细胞分裂时,母细胞内的染料会被平均分配到子细胞中,细胞的荧光信号减少一半,细胞分裂代数越多,信号降低程度越大。
细胞因子检测
细胞因子是一类能在细胞间传递信息、具有免疫调节和效应等功能的蛋白或小分子多肽。根据功能可分为六大类:白细胞介素、干扰素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子、生长因子和趋化因子。胞内细胞因子:胞内染色法( intracellularstaining assay);胞间细胞因子:CBA法(cytometric bead assay,流式微球阵列)。其优点为单细胞水平,可多参数检测。