3-磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒(微量法)
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详细信息
商品属性：
货号 | 规格 | 货期 | 英文名称 |
CS-C8191 | 100管/96样 | 1～3天 |
商品介绍：
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化1，3-二磷酸甘油酸转变为3-磷酸甘油酸，产生1分子ATP，具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。
测定原理：
3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm处的吸光度变化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿。
步骤和注意事项：
准备实验环境：确保实验区域清洁，使用酒精清洁计数板和盖玻片，然后用吸水纸轻轻擦干。
细胞培养：
准备试管或培养皿、细胞培养基和待培养的细胞。
取出保存于低温下的细胞苗，并加入培养基中，摇晃混合均匀。
用移液管将细胞培养基和细胞种植在试管或培养皿中。
将试管或培养皿放置于恒温培养箱中，定期更换培养液。
细胞冻存与复苏：
细胞系的冻存是将生长较好的传代细胞悬浮在加有冷冻保护剂的溶液中，以一定的冷冻速率降至零下某一温度，并在此温度下对其长期保存的过程。
复苏则是将冻存的细胞系恢复到常温的过程，原则是“慢冻快融”，以较大限度地保存细胞活力。
细胞计数：
制备细胞悬液，使用消化单层培养细胞或收集悬浮培养细胞，制成单个细胞悬液。
在显微镜下，用10×物镜观察计数板四角大方格中的细胞数，细胞压中线时，只计左侧和上方者，不计右侧和下方者。
荧光显微镜使用：
使用荧光染料对细胞进行染色，并观察细胞所发出的荧光信号，以研究细胞结构和功能。
聚合酶链反应（PCR）：
准备PCR反应所需的DNA模板、引物、聚合酶和核苷酸。
按照PCR反应液配制表制备反应液。
在反应器中加入反应液，开始PCR反应。
PCR反应的成功与否，可以通过电泳、测序等方法进一步确认。
转染：
准备转染所需的载体DNA和细胞。
制备转染试剂，将DNA载体溶解于转染试剂中，与细胞混合均匀。
处理转染细胞，并进行下一步实验。
在操作过程中，应注意实验室安全规范，避免随意丢弃垃圾，及时登记购买耗材或试剂，保持实验环境的清洁和安全
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