注意事项：

1. 本试剂盒的检测试剂中含有萤光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。尽管经测试本试剂反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，为取得良好的使用效果，*次解冻后可适当分装保存。反复冻融过程中，可能会导致检测试剂中出现少量沉淀，此时宜平衡至室温，并尽量溶解。如仍有残留的不溶物，可以离心去除后使用，经测试不会影响后续的检测效果。

2. 检测时需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。

3. ECM Kit(大鼠IgG)免疫检测使用说明中提供了检测ATP标准品的方法，实际检测细胞活力时通常并不需要检测ATP标准品。

保存条件：4℃可保存一年 。

Western Blotting 检测试剂盒内容：

1.封闭试剂：10g 蛋白质干粉(脱脂奶粉)。

2.HRP 标记兔抗大鼠IgG：0.1ml 亲和纯化抗体，经过人血清吸附以去除交叉抗体。效价 1：2000-10000。

3.ECM 显色剂：总量 100ml。含 A 液 5ml(×20倍)；B 液 5ml(×20倍)。每个试剂盒足够 10 张小膜或800 c㎡面积的膜显色

工作原理：

蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下 ,向着与其电荷相反的电极移动的现象。根据所采用的支持物不同,可分为：琼脂糖凝胶电泳、淀粉凝胶电泳、聚丙烯凝胶电泳等。其中以聚丙烯凝胶电泳(PAGE)广泛。它的优点为：无电渗作用,样品用量少(1-100μg),分辨率高,可检出 10-9-10-12mol的样品,凝胶机械强度大,重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶。SDS-PAGE 是的定性分析蛋白质的电泳方式,它根据蛋白分子大小不同，迁移速率的不同而达到分离目的，特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量。

免疫印迹是将凝胶电泳的高分辨力和免疫化学检测的特异性融为一体。免疫印迹技术首先借助凝胶电泳将蛋白质抗原分离，然后将凝胶中的蛋白质转印到膜上使之成为被分离的一个拷贝。免疫印迹为检测样品中是否存在目的蛋白提供一种可靠的方法，该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特异性抗体结合的特性并通过相对迁移率来体现该蛋白的分子量。如果想要了解样品中是否存在某一抗原，以及该抗原的含量或该抗原多肽链的相对分子质量以及亚型，是否与其他蛋白结合，蛋白质的酪残基是否发生磷酸化等有关问题均可采用免疫印迹。

免疫印迹包括多个简单步骤，可在一到两天完成，该方法具有高效，简便，灵敏等特点。

实验操作步骤：

1．蛋白质的样品制备：

1)细胞培养蛋白质样品的制备：

1：消化后裂解：细胞培养至 80%左右密度时，以含 0.25%yi蛋白酶消化,室温，低速离心，弃上清。细胞经预冷的PBS 漂洗3次，加入 0.1-1ml 裂解液(根据细胞数量定)反复吹打。

用途：适于一抗为大鼠IgG的Western Blotting 检测。

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细胞生物学研究有以下几个方面：

细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括：

①细胞核、染色体以及基因表达的研究；

②生物膜与细胞器的研究；

③细胞骨架体系的研究；

④细胞增殖及其调控；

⑤细胞分化及其调控；

⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)；

⑦细胞的起源与进化；

⑧细胞工程.

细胞生物学研究的常用技术有哪些：

1.显微技术：包括显微观察,显微操作.

2细胞组分分析技术：离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
3.细胞工程：细胞培养。