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RT-01032 去基因组第1链cDNA合成预混体系Master Premix(For qPCR)
- 型号
- RT-01032
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重庆致宏生物科技有限公司是一家专注于为生命科学和生物技术领域，为客户提供完善的实验室解决方案和完善的实验室试剂耗材供应链及相关技术服务的企业。
主营产品覆盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、干细胞研究等包含ELISA试剂盒、培养基、支原体检测试剂盒、胎牛血清、科研抗体、生物耗材、仪器等。经销worthington、珠海贝索、FOREGENE 福际生物、同立海源、成都正能、Biofout、辽宁润基、BI、BD、stemcell 、Corning等品牌产品。
在技术服务上，公司技术服务团队产品覆盖分子生物学、细胞生物学等领域。
公司秉承“诚信经营、服务至上”的理念服务于科研市场，市场主要面向各大学院校及科研单位（军医大学及其附属医院，重庆大学，重庆医科大学及其附属医院、西南大学等院校等）。
详细信息
产 品 名 称 | 去基因组第1链cDNA合成预混体系Master Premix(For qPCR) RT EasyTM II(With gDNase) | ||
货 号 | RT-01031 | RT-01032 | |
规 格 | 25 × 20 μL rxns | 100 × 20 μL rxns | |
价 格 | ￥427.00 | ￥1,284.00 | |
| 描 述 | 本产品是专门为Real Time PCR研制的快速去除基因组DNA污染的逆转录体系。 5× gDNase Mix能在42°C，2min快速去除RNA中残留的基因组，有效的避免了基因组对qPCR结果的干扰。 | ||
产品介绍
RT EasyTM II(With gDNase)是专门为Real Time PCR研制的快速去除基因组DNA污染的逆转录体系。5×gDNase Mix能在42°C，2min快速去除RNA中残留的基因组，有效的避免了基因组对qPCR结果的干扰。
5× RO-EasyTM Mix内含福际专门研制的Foregene Reverse Transcriptase，是一款新型反转录酶，具有更强的RNA亲和性。优化后的体系使得逆转录速率更快，42°C，15min即可完成第1链cDNA的合成。
该试剂盒的逆转录体系在50°C条件下逆转录酶也能保持良好的活性，因此对于复杂的RNA模板更优势，能轻松的转录GC含量高、二级结构复杂的RNA模板。
试剂盒应用
v 直接用于RealTime PCR定量分析基因的表达。
v 可以快速、准确地对RNA病毒等微量RNA进行分析。
v 高GC含量或具有复杂二级结构RNA模板的逆转录。
储存条件
试剂盒保存于-20℃。产品收到后立即存放于-20℃恒温冰箱中。如果存储条件适当，产品在1年有效期内不会降低任何性能。
剂盒内容
5× gDNase Mix：gDNA去除剂，在进行RT反应前务必按照操作说明使用该试剂(内部甘油含量较高，-20℃以上可能不会结冰，属于正常现象)。
5× RO-EasyTM Mix：包含福际生物专门研制的Foregene Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、dNTPs、稳定剂、增强剂、优化剂及优化配比的逆转录引物(Random Primer、Oligo(dT)18 Primer)。
Foregene Reverse Transcriptase
Foregene逆转录酶能够提供高效、特异性强的逆转录反应。逆转录酶表现出很高的亲和力，并在 50°C反应温度条件下仍然保持良好的逆转录活性，能够很好的逆转录其他逆转录酶不能处理的二级结构复杂的RNA。Foregene Reverse Transcriptase 灵敏度高，使用的RNA 量范围广泛(0.1pg≤RNA≤1μg) 。
RT Mix耐受性
经测试分析，2× RT OR-EasyTM Mix对酒精和胍盐显示出很高的耐受性。实验室纯化获得的RNA常有酒精及胍盐残留，对逆转录有很强的抑制性，导致逆转录效果不理想或逆转录效率低。Foregene RT Easy系列产品对酒精及胍盐的耐受能力使得逆转录更容易、高效率的进行。
酒精耐受性分析
胍盐耐受性分析
RNA模板浓度
(0.1pg-1μg total RNAor 0.01pg-0.1μg mRNA) /20 μL体系。
非特异性扩增
Answer
1. 引物设计不合理
建议：按照引物设计原则进行引物的设计。
2. 基因组残留。
建议：确定第1步gDNA去除反应温度为42°C，也可延长反应时间至5min。
RT-QPCR无扩增信号
Answer
1. RNA被降解。
建议：提取RNA的材料尽量新鲜，应用高质量高纯的的RNA。
2. RNA含有抑制剂。
建议：逆转录抑制剂一般包括SDS、胍盐、EDTA等，建议通过70%的乙醇对RNA沉淀进行清洗，除去抑制剂。
3. 引物设计问题。
建议：按照引物设计原则，重新设计引物进行检查。
空白对照出现目的条带
Answer
1. 操作工具或试剂污染。
建议：实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将DNA样品吸入加样枪内或溅出离心管外。
2. PCR反应体系制备时发生污染。
建议：操作时进行必要的防护措施，比如：戴乳胶手套，使用带滤芯的枪头。使用防污染体系的real time PCR Mix。
3. 引物出现降解。
建议：使用SDS-PAGE电泳检测引物是否发生降解，更换新的引物进行荧光检测实验。
