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MF2: 荧光光谱发展中的一个革命性的进步
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生产厂家HORIBA Jobin Yvon 引入了一个新的皮秒荧光寿命测量仪器:MF2。荧光科学家们现在有了一个重要的工具可以帮助他们认识实时的自然过程。MF2是基于在HORIBA Jobin Yvon中发展起来的的技术,相对于传统的方法,它可以使数据收集的速率增加10,000倍,使动力学范围增加1000倍。
现有的荧光体系提供了灵敏性,选择性和宽的时间分辨率。有了HORIBA Jobin Yvon的仪器,我们可以测量分子荧光的持续时间为皮秒到纳秒之间,甚至于更长。两种测量方法是“时间相关单光子计数”(TCSPC)和“相位调制”(频域)。HORIBA Jobin Yvon 在提供基于以上两种方法的性能的仪器上是有竞争优势的。频域记录了光电倍增管的响应,揭示了与激发光束相关的正弦荧光发射的相位和调制振幅。在几个调制频率下进行以上重复测量就得到了荧光寿命。然而,这种方法的时序性质需要更多的时间来完成实验。很显然,这种方法需要改进。
HORIBA Jobin Yvon 利用最近在频率合成方面的进展,专门发展了一种可以避开传统限制的新技术。通过把多重频率分组为一种高频波的形式,极大地扩大了可以得到的频率范围,我们把测量荧光寿命的时间从分钟级降低到毫秒级,达到了10,000倍的改变。我们把这次在仪器使用上的变革称为MF2,它带来了以往难以达到的实验速度和性能。
HORIBA Jobin Yvon 的变革:快速MF2技术…
图1 从八种频率(淡蓝)混合的激发光束中得出的荧光信号(红色)。新的MF2利用这种激发方法在10毫秒内对荧光寿命进行表征。
MF2把速度和精密度联合起来用于实时动力学检测荧光寿命…
图2 在9-CA的甲醇溶液中加入POPOP以后相角(左)和调制(右)的改变。注意当POPOP加入的时候相角是如何降低的,而此时调制却在增长。
一个实际的例子如下:9-氰基蒽(τ = 11.8 ns)的甲醇溶液被放置在池子里,使用四种频率混合的340nm的光来激发。超过十秒的荧光响应通过一个长程的Schoot KV 滤光片被记录下来(λ > 370 nm)。注意在甲醇中加入POPOP(τ = 1.32 ns)以后相角和调制的变化。时间分辨率为50ms每个数据集,这对混合物可以更清楚的认识。两种寿命且比例为50:50的混合物伴随而来的是一个在响应上的改变。
MF2利用了我们简单和强大的FluorEssence™软件,通过单窗口来建立整个光谱实验(图3)。与选择频率来运行实验不同,MF2带来一个全新的范例:你决定寿命可能的范围以后,软件会为你选择频率。
图3 FluorEssence™软件来运行的一个MF2寿命动力学实验的简单设置。