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伊莱博生物科技(上海)有限公司(简称,伊莱博生物),总部位于上海市长江软件园,2024年1月与上海大学医学院成立联合研究中心,是一家以生命科学研究为基础,专注于研究成果转化及技术服务的创新型高科技企业。主要致力于为科研人员及机构提供专业的技术团队和实验平台,建立包含肿瘤生物学、病理学、免疫学、细胞生物学、生物化学与分子生物学和动物实验等学科的研究服务体系。

伊莱博生物拥有丰富的研究经验,具备完善的系统化管理能力和科研服务体系。目前已自建细胞、分子、病理等实验平台近1000平方米,拥有的仪器设备、细胞库、样本保存库等。动物实验中心近1800平方米,可满足同时饲养清洁级和SPF级动物。核心实验技术团队主要来自中国科学院大学、复旦大学、上海交通大学等重点高校及科研机构,能够为客户提供研究方案策划、项目实施及项目深度分析等方面的技术支持。公司目前参与研究项目已经涵盖心脑血管、肿瘤、内分泌、生殖、免疫、神经等诸多领域。


为了响应大力发展基础研究的号召,推动生命科学领域的进步,伊莱博生物充分利用积累多年的科研资源优势,提供培训服务。通过实验理论培训和实践相结合,充分了解科学研究和实验操作的全过程,培训规范的实验操作、分析问题和解决问题的能力,分层次培养科研人才,为其今后的科研工作奠定坚实的基础。


因为专业,所以值得信赖;因为专注,所以高速发展;坚持“诚信创新,互利共赢”的原则;朝着“解决科研问题”这一目标,伊莱博人将通过自身的努力,与一线科研人员共同推动生命科学的快速发展!



详细信息

实验步骤

1. 样品准备

a. 细胞上清样品,需将培养瓶内的细胞消化离心取上清即可(如800g5分钟)。

b. 血清样品,将全血收集至不含抗凝剂的试管内,在室温下放置1小时,待全血自然凝固并析出血清后,4℃1500g离心10分钟,取黄色上清即得血清。

c. 血浆样品,将全血收集至含抗凝剂的试管内,混匀后置冰上,4℃1500g离心10分钟,取黄色或淡黄色上清即得血浆。

2. 确定样品测试组、标准品和空白组组所需的微孔条数量,每个浓度做两个平行重复,从支架上取出对应数量的微孔条,剩余储存在箔袋中,密封后在4℃储存。

3. 配制对应浓度的捕获抗体溶液、检测抗体溶液、包被液、洗涤液、样品稀释液、显色液、终止液、链霉亲和素-HRP(若使用试剂盒则没有此步骤或按试剂盒要求配制)。

4. 每孔加入100μL 捕获抗体溶液,用封板膜覆盖,4℃孵育过夜,过夜后舍弃舍板内溶液。

5. 每孔加入300-400μL洗涤液清洗五次,且最后一次置于厚吸水纸上拍干(若使用试剂盒则没有步骤45)。

6. 用样品稀释液按照1:5, 1:10, 1:50, 1:100, 1:1000, 1:2000稀释样品,以此确定样品IL-2的检测浓度。

7. 配制梯度浓度的IL-2蛋白标准品,将工作浓度设置为1200pg/mL, 600pg/mL, 300pg/mL, 150pg/mL, 75pg/mL, 37.5pg/mL, 18.75pg/mL9.38pg/mL,以此浓度来绘制标准曲线。

8. 分别将样品、标准品、样品稀释液按照100μL/孔加入相应孔中作为标测试组、标准品组、空白组。

9. 将偶联sws的抗人IL-2抗体按照50μL/孔加入所有孔中,用封板膜覆盖,室温避光孵育2小时。

10. 每孔加入300-400μL洗涤液洗板五次,且最后一次置于厚吸水纸上拍干。

11. 在所有孔加入100μL稀释后的链霉亲和素-HRP,用封板膜覆盖,室温避光孵育1小时。

12. 每孔加入300-400μL洗涤液洗板五次,且最后一次置于厚吸水纸上拍干。

13. 在所有孔中加入100μL TMB显色液。用封板膜覆盖,室温避光孵育30min

14. 在所有孔中加入终止液50μL,混匀后立即测量A450值。

15. 计算每一组重复的标准品和样品的平均吸光度值。重复次数应在平均值的20%以内。

16. 绘制IL-2标准品标准曲线。以标准品浓度为横坐标,A450值为纵坐标,以平滑线连接各标准品的坐标点。通过样品的吸光度值和标准曲线计算出样品的相应浓度。


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