起订量:
SH0121 蔗糖磷酸化酶(SP)检测试剂盒
初级会员第5年
生产厂家自主生化试剂品牌warbio已经入驻多家高校平台,先后入驻南京大学,南京农业大学,东南大学,西湖大学,华南理工大学,北京师范大学,福建农林大学,北京库巴扎,天津基理,上海至采信息采购平台等公司秉持诚信经营,为科研工作者提供更好的产品。专业代理销售国内外生命科学领域的产品以及warbio沃博生物常规生化试剂,公司长期以来与众多国内外厂家和多家专业代理销售公司保持密切联系、沟通与合作,拥有稳定、有效的产品供应渠道。公司长期以来以提供高质量的产品、实惠的价格和优质的服务赢得客户的好评,与多家高等院校、研究所、医院、制药企业等大型科研机构建立长期稳定的合作关系。
主要代理北京庄盟生物分子试剂,Abmart艾比玛特抗体,美国Phytoteche一级代理,美国AATBIO细胞染料,安普未来恒温扩增试剂盒,英国TwistDx公司RPA等温扩增试剂盒,美国GLPBIO抑制剂,Tolobio吐露港生物 ,药物发现一站式平台 陶术生物Topscience等国外生命科学产品试剂耗材。
货号 | 名称 | 规格 |
SH0121 | 蔗糖磷酸化酶(SP)检测试剂盒(分光光度法50T/48S) | 50管/48样 |
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷键,催化葡萄糖基转移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相应的葡萄糖基低聚糖。此外,SP还能催化qingkun合成熊果苷,具有jiqiang的美白效果,在化妆品工业中具有重要应用。
测定原理:
SP能够以磷酸为受体,催化蔗糖产生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原NADP+生成NADPH,导致340nm光吸收值增加。测定340nm吸光度增加速率,即可计算SP活性。
组成:
产品名称 | SH0121-50T/48S | Storage |
提取液:液体 | 50ml | 4℃ |
试剂一:液体 | 35ml | 4℃ |
试剂二:粉剂 | 1瓶 | -20℃避光 |
试剂三:粉剂 | 1瓶 | -20℃避光 |
说明书 | 一份 |
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存,临用前加6ml蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1瓶,-20℃避光保存,临用前加12ml蒸馏水水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
自备仪器和用品:
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 ml石英比色皿和蒸馏水。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃,离心10min,取上清待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
测定步骤:
1.分光光度计预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2.操作表
试剂名称 | 对照管 | 测定管 |
试剂一(μl) | 600 | 600 |
试剂二(μl) | 100 | 100 |
试剂三(μl) | 200 | 200 |
样本(μl) | 100 | |
蒸馏水(μl) | 100 | |
迅速混匀,于1ml石英比色皿,37℃下测定340nm的初始吸光值与反应2min后的吸光值,测定管记作A1与A2,对照管记作A3与A4,△A=(A2- A1)-(A4- A3)。 |
SP活性计算公式:
1. 按照蛋白浓度计算
酶活定义:37℃,pH6.8时,每毫克蛋白质每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
SP活性(nmol/min/mg prot)=×V反总÷V样÷Cpr÷T=804×△A÷Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活定义:37℃,pH6.8时,每克样本每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
SP活性(nmol/min/g 鲜重)=×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T=804×△A÷W
3. 按照细胞数量计算
酶活定义:37℃,pH6.8时,每104个细胞每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
SP活性(nmol/min/104 cell)=×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量(万个))÷T=804×△A÷细胞数量(万个)
:NADPH摩尔消光系数,6220 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应体系总体积,1ml;V样:反应体系中样本体积,0.1ml;W:样本质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/ml;V样总:加入提取液体积,1ml;T:反应时间,2min
注意事项:
1. 可选用BCA法测定蛋白含量试剂盒测定蛋白含量。
2. 样本较多时,可以按照每个样本试剂一:试剂二:试剂三=600:100:200(μl)的比例配制工作液,用多少配多少,临用前立刻配制,10分钟内使用。