MX4580-50nmol FerroFarRed 亚铁离子荧光探针
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上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本,以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
FerroFarRed (Fe2+indicator) 亚铁离子荧光探针
产品标签
FerroFarRed;FeRhoNox-1;FerroOrange;Labile ferrous ion 不稳定铁(II)离子;Fe2+荧光探针Ferroptosis 铁死亡;C11 BODIPY 581/591 脂质过氧化探针;
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
FerroFarRed (Fe2+ indicator) 亚铁离子荧光探针 | MX4580-50nmol | 50nmol | 2480 |
FerroFarRed (Fe2+ indicator) 亚铁离子荧光探针 | MX4580-100nmol | 100nmol | 4580 |
FerroFarRed (Fe2+ indicator) 亚铁离子荧光探针 | MX4580-50nmol-S | 50nmol-S |
产品描述
FerroFarRed,也称为SiRhoNox-1、ER-SiRhoNox,是一种特异性检测不稳定的铁(II)离子(Fe2+)的荧光探针。FerroFarRed基本无荧光,一旦与Fe2+反应后,不可逆的生成一种远红荧光产物(Absmax=646nm,FLmax=662nm,图1. FerroFarRed的光谱特征)。生理浓度下的铁(III)离子(Fe3+)或其它除铁离子以外的二价金属离子都不会使其荧光增强(见图2. FerroFarRed的金属离子反应特异性)。FerroFarRed具细胞膜渗透性和高选择性,且在高达100μM的浓度下对细胞几乎无毒性,适用于活细胞内Fe2+的检测,倾向定位在内质网(ER)。适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜、荧光酶标仪以及流式细胞仪(配置红色激光器)分析。
图1.FerroFarRed的光谱特征。FerroFarRed在0.05M HEPES buffer,pH 7.4下的吸收光谱(左)和荧光光谱(右)。FerroFarRed的吸收波长在646nm,而荧光波长在662nm。
图2.FerroFarRed的金属离子反应特异性。FerroFarRed(5 μM)与各种金属离子反应后,用荧光酶标仪测定荧光强度(激发波长:630nm,发射波长665nm)。可见,仅与Fe2+反应后发生显著的荧光增强。
保存与运输方法
保存:≤-20℃避光干燥保存,至少1年有效。
运输:冰袋运输。
注意事项
1) FerroFarRed倾向定位在内质网,但也可能检测细胞质池内的Fe2+,目前针对这一点未做明确评估。
2) 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
3) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明
一、 需要自行准备的材料
1.1 细胞培养级或超纯DMSO(比如:MS4601A-100ML)【强烈建议将高纯的DMSO分装成单次用量保存在极低温冷冻室内,比如-80℃,避免吸潮。降解的DMSO可能会增加FerroFarRed的背景信号】
1.2 合适的观察缓冲液(比如:PBS, pH 7.4;HBSS;等)。不要含酚红。
1.3 无血清细胞培养基(D-MEM等)
二、探针准备
2.1从冰箱取出FerroFarRed,置于室温回温至少30min,将其置于微量离心机内低速离心。将瓶内的粉末离心到管底后,再开盖。
2.2 往一管FerroFarRed(50nmol)内加入50μl 高质量DMSO,用枪反复吹吸5次或以上,使其完quan溶解即得到1mM FerroFarRed储存液。【注意:FerroFarRed是蓝色固体,但溶液几乎无色(浅蓝色)】。建议单次用完储存液,若实在用不完,请根据单次用量分装,置于-80℃避光保存。用中性缓冲液来稀释储存液。
三、HeLa细胞Fe2+的染色步骤(荧光成像分析)
3.1 在玻底培养皿内接种细胞,培养过夜。
3.2从培养皿内吸走培养基,用合适的观察缓冲液(比如:HBSS)清洗两次。
3.3 用无血清细胞培养基稀释1uM FerroFarRed储存液,制备成5mM的染色工作液。
3.4 将染色工作液加入培养皿内,于37℃孵育1h。
【注意:①建议根据细胞类型和自身实际需求优化工作浓度和孵育时间。②如果细胞很容易从培养皿上脱落,建议使用多聚L-赖氨酸或其它包被基质包被的培养皿来接种细胞。】
3.5 染色后用观察缓冲液(比如:HBSS)清洗一次,替换成新的观察缓冲液。
3.6 在荧光显微镜下观察细胞。
四、HepG2细胞Fe2+的测定(流式分析)
4.1 于多孔培养板内接种细胞,过夜培养。
4.2 从培养板内吸走培养基,用合适的观察缓冲液(比如:HBSS)轻轻的清洗两次。
4.3 用无血清细胞培养基稀释1uM FerroFarRed储存液,制备成5mM的染色工作液。
4.4 将染色工作液加入培养板内,于37℃孵育1h。
【注意:建议根据细胞类型和自身实际需求优化工作浓度和孵育时间。】
4.5 染色后,用PBS清洗一次,之后加入0.25% yi酶-EDTA消化细胞。
4.6 于冰上用PBS稀释0.25% yi酶-EDTA,之后500 x g离心细胞悬液5min,以沉淀细胞。
【注意:不可用血清来中和yi酶。】
4.7 吸走上清,用PBS重悬细胞。
4.8 用细胞筛网(40μm尼龙筛网)过滤细胞,去除细胞碎片。
4.9 上机,流式细胞仪分析。
对于激光激发:635nm波长左右的激光器比较适合。荧光在660nm左右观察。
对于荧光显微镜观察:选择检测Cy5的红色激发滤片。对于流式分析,选择检测APC的滤片。
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FerroFarRed的染色示例(来自文献)
Ref 1. Li Z, Jiang L, Chew SH, et al. Carbonic anhydrase 9 confers resistance to ferroptosis/apoptosis in malignant
mesothelioma under hypoxia. Redox Biology. 2019 Sep;26:101297. DOI: 10.1016/j.redox.2019.101297. PMID:
31442913; PMCID: PMC6831888.
检测方法(Fe(II)的细胞定位):Catalytic Fe(II) was detected with a fluorescent turn-on probe, SiRhoNox-1 (FerroFarRed;), as previously described. Cells (5 × 104) were cultured in normoxia on 35-mm glass bottom dish for 16 h at 37 °C. After treatment with CA9 inhibitors under hypoxia for 48 h, cells were co-stained with 5 μM of SiRhoNox-1 and 200 nM of LysoTracker Green in FluoroBrite DMEM for 30 min at 37 °C in normoxia, followed by incubation with 75 nM of MitoTracker Red for another 30 min. We confirmed that 1-h incubation in FluoroBrite DMEM containing 0.1 mg/L (0.25 μM) Fe(NO3)3 scarcely affects iron metabolism of the cells within this limited period. Medium was replaced with new FluoroBrite DMEM, followed by observation with a confocal microscope (LSM880, Carl Zeiss; Oberkochen, Germany). The excitation/emission used for SiRhoNox-1, LysoTracker and MitoTracker probes were 633/670, 504/511 and 579/599 nm, respectively. Local signal intensity of the regions overlapped with each organelle-trackers were analyzed with ZEN Imaging Software (Carl Zeiss).
Fig. 1 CA9 overexpression in MM cells correlates with increased catalytic Fe(II) in response to hypoxia. (F) Differential levels of catalytic Fe(II) in normoxia or hypoxia of ACC-Meso-1 cells were determined by staining with SiRhoNox-1 (5 μM), followed by evaluation with a flow cytometer after 48 h-incubation. (G) Localization of catalytic Fe(II) in normoxic or hypoxic ACC-Meso-1 cells were analyzed by co-staining of SiRhoNox-1 (5 μM), LysoTracker (200 μM) and MitoTracker (75 μM) after 48 h-incubation and observation with a confocal microscope. Integrated intensity per cell (N =7) was quantified by ZEN Imaging Software (ZEISS) (means ± SEM; *P < 0.05, **P < 0.01, ***P< 0.001 vs each control unless indicated by bar). Refer to text for details. SM, sarcomatoid mesothelioma; EM, epithelioid mesothelioma; N, normoxia; H, hypoxia; A.U., arbitrary unit.
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本,以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。