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人宫颈上皮细胞癌
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污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等
关于培养基的无菌状况,取培养基至培养瓶中(不加细胞),37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题。
也可以在培养基中事先加入双抗(*和氨苄*)。但双抗有时会影响细胞的状态,所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗,以避免影响实验结果。
人宫颈上皮细胞癌当重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。
高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如*和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是*的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
1 在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。
2 分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。例如,**下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
3 每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。
4 确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2-3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2-3代。
5 在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
6 重复步骤4。
7 在无抗生素的培养基中培养4-6代,确定污染是否以已被消除。
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