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50管/48样 超氧化物歧化酶SOD测试盒(WST-8法)_分光法
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经销商上海纪宁实业有限公司位于中国城市——中华人民共和国直辖市之一的上海,已发展成生产、销售为一体的创新性企业。公司专注于生物、生化领域产品销售,主要经营的有ELISA试剂盒、生化试剂、抗体、标准品、对照品、细胞、血清、培养基等生化产品。
公司主要产品分类:
ELISA试剂盒:人ELISA试剂盒、小鼠ELISA试剂盒、大鼠ELISA试剂盒、仓鼠ELISA试剂盒、裸鼠ELISA试剂盒、猪ELISA试剂盒、鸡ELISA试剂盒、鸭ELISA试剂盒、羊ELISA试剂盒、马ELISA试剂盒、植物ELISA试剂盒、昆虫ELISA试剂盒等
生化试剂:氨基酸类、酶类、蛋白质类、色素类、表面活性剂类、缓冲剂类、抗生素类、植物激素及核酸类、维生素类、碳水化合物类、培养基类等试剂产品
标准品、对照品:西药标准品、中药化学标准品、抗生素标准品、生化标准品、中药工作对照品等标准品及对照品
超氧化物歧化酶SOD测试盒(WST-8法)_分光法
测定方法:分光光度法
产品规格:50管/48样
注 意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
SOD(EC 1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化超氧化物阴离子发生岐化作用,生成 H2O2 和 O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是 H2O2 主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。
超氧化物歧化酶SOD测试盒(WST-8法)_分光法
测定原理:
通过氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.),O2-.可与 WST-8 反应产生水溶性染料甲臜,后者在 450nm 处有吸收;SOD 可清除 O2-.,从而抑制了甲臜的形成;反应液越深,说明 SOD 活性愈低,反之活性越高。
需自备的仪器和用品:
分光光度计、离心机、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制:
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃避光保存;
试剂二:液体 300μL×1 支,4℃避光保存;
试剂三:液体 100μL×1 支,4℃保存;
试剂四:粉剂×2 瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 450nm,蒸馏水调零。
2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释 50 倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水 1:49稀释。
3、 工作液配制:在试剂一加入 250μL 试剂二,充分混匀。配好的试剂 4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照 20mL:0.1mL 的比例混匀配制)
4、将一瓶试剂四用 5mL 蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)
5、样本测定(在 1mL 玻璃比色皿中依次加入下列试剂)