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洗板方法
1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min 后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5 次。
2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5 次。
操作步骤
1. 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 待测样本孔先加*10μL,再加待测样本50μL;
4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5 次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B 各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min 内,在450nm 波长处测定各孔的OD 值。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel 工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD 值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。