试剂盒组成

需要而未提供的试剂和器材

1.   酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) 。

2.   洗板机（可调注液量，保证每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。

3.   超净工作台，生物安全柜，通风柜。

4.   高精度单道加液器（量程为0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).

5.   高精度多道加液器（8道或12道，量程为50-300μl).

6.   37℃恒温箱。

7.   低温离心机。

8.   电冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.

9.漩涡混合仪，低频振荡器等

注意．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存或根据存放，时间做相应温度调整，但应避免反复冻融，（由于样本种类过多，每个单位处理方式不一样，本说明书不做详细介绍）。

操作程序

1． 标准品的稀释：（本试剂系统提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）按下表格执行：

2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3． 加样:(详细操作流程请客服索要说明书）

4． 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释备用。

5． 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6． 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。

7． 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

8． 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

结果判断

1.每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。（若不减零孔值，标准曲线的零孔应相交于Y轴）

2.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种熟悉应用软件来计算。

3．手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。*使用专业制作曲线软件进行分析计算结果。

4．若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。