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SMC-1胸膜细胞瘤上海谷研科技有限公司的原代细胞株及血清,ATCC细胞株、hyclone澳洲特级胎牛血清,优等胎牛血清,标准胎牛血清,gibco特优级胎牛血清血清,新生牛血清。
细胞术检测样品制备方法
直接标记抗体(FITC标记抗体)SMC-1胸膜细胞瘤:
(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞,800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。[2]
未标记抗体间接免疫荧光标记法:
(1)收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml PBS重悬细胞,800rpm离心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的PBS 重悬细胞,800rpm离心5min,洗去未结合一抗,重复一次。
(5)加入荧光标记(FITC)标记的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm离心5min,去上清,PBS洗涤两次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞;固定待测。
(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备:
(1)待测样本制成单细胞悬液,然后200g离心5分钟,弃上清。
(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小时。
(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升,取1毫升细胞悬液,用PBS洗三次,细胞重悬于1毫升PI染液中,37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)PI染液终浓度为50微克/毫升,RNase A终浓度为20微克/毫升。
其他*产品:
1-broMohenicosafluorodecane 1-溴全氟癸烷 307-43-7
1DisodiuM 4-aMino-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonate 3963-80-2
1g 479024-70-9
3-[(TERT-BUTOXYCARBONYL)AMINO]-3-CYCLOPENTYLPROPANOIC ACID 776330-74-6
1g 5g 4919-00-0
1g 5g 4-*唑啉-7-甲酸 942507-89-3
1g 5g 10g 6041-23-2
1g, 2 5 500Mg 3,3'-(羟基亚硝基肼)二-1-丙胺 146724-95-0
1g, 2g, 5g 2-氟丙烯酸 430-99-9
1g,2g,5g 2-甲基-1-苯基哌嗪 2946-76-1
1g/850 934505-32-5
1g/2100 2,7-二溴菲醌 84405-44-7
1g? 5g 74528-53-3
1g-5g 原人参二醇 2302-51-9
1H-1,2,4-Triazole,5-fluoro-(9CI) 42297-29-0
1H-2-Benzopyran-1-one 異薰草素 491-31-6
1H-Benz[de]isoquinoline-5,8-disulfonicacid, 7-aMino-2-(5-aMinopentyl)-2,3-dihydro-1,3-dioxo-, potassiuM salt (1:2) 149733-79-9
1H-BENZIMIDAZOL-2-AMINE,4,7-DIMETHYL- 67468-93-3
2-Phenyl-1H-benzoiMidazol-5-ylaMine 2-苯基-1H-苯并咪唑-5-基胺 1767-25-5
1H-BENZIMIDAZOLE, 3A,4,5,6,7,7A-HEXAHYDRO- 2018-50-0
1H-BenziMidazole-2-carboxaldehyde 苯并咪唑-2-甲醛 3314-30-5
细胞冻存
1.将细胞消化下来,移入离心管离心,弃上清
2.准备冻存液比例:50%FBS+40%培养基+10%DMSO(现用现配)
3.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内.
放入-20度冰箱2-4小时后.再放入-80度冰箱过夜,第二天放入液氮罐保存
原则 慢冻速溶
4.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内。
冻存时间。放入4度冰箱10分钟。再放入-20度冰箱30分钟-1小时。不能超过1小时。zui后放入-80度冰箱过夜。第二天放入液氮中。