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BEL-7405肝癌细胞 上海谷研科技有限公司的原代细胞株及血清,ATCC细胞株、hyclone澳洲特级胎牛血清,优等胎牛血清,标准胎牛血清,gibco特优级胎牛血清血清,新生牛血清。
细胞术检测样品制备方法
直接标记抗体(FITC标记抗体)BEL-7405肝癌细胞:
(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞,800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。[2]
未标记抗体间接免疫荧光标记法:
(1)收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml PBS重悬细胞,800rpm离心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的PBS 重悬细胞,800rpm离心5min,洗去未结合一抗,重复一次。
(5)加入荧光标记(FITC)标记的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm离心5min,去上清,PBS洗涤两次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞;固定待测。
(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备:
(1)待测样本制成单细胞悬液,然后200g离心5分钟,弃上清。
(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小时。
(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升,取1毫升细胞悬液,用PBS洗三次,细胞重悬于1毫升PI染液中,37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)PI染液终浓度为50微克/毫升,RNase A终浓度为20微克/毫升。
其他*产品:
15(S)-HETE 54845-95-3
15,16-Dihydro-3-hydroxy-3'H-cycloprop[15,16]androsta-5,15-dien-17-one (3b,15a,16a)-15,16-二氢-3-羟基-3'H-环丙[15,16]雄甾-5,15-二烯-17-酮 67372-65-0
15628 Hexaketocyclohexane octahydrate,97% 环己六酮十水合物 527-31-1
15-BROMOPENTADECANOIC ACID 15-溴十五酸 56523-59-2
15g 18708-60-3
N-Methyl-3-(triethoxysilyl)propylaMine 6044-50-4
1-5g 62595-52-2
1-benzylpiperidine-2,4-dione 70571-31-2
15Mg 抗氧剂CA 1843-03-4
1-5Mg 60280-57-1
15-Nonacosanone 2764-73-0
16a-hydroxyestrone 16ALPHA-羟基雌酚酮 566-76-7
16-Dehydropregnenolone acetate 醋酸妊娠双烯醇酮酯 979-02-2
16-hydroxyhexadecanoic acid 16-羟基棕榈酸 506-13-8
16-hydroxytabersonine 11-HYDROXYTABERSONINE 22149-28-6
16-Methoxytabersonine ERVAMYCINE 27773-39-3
17 alpha Methyl -testosterone 17alpha-甲基异睾酮 1965/4/3
17-(FMoc-aMino)-5-oxo-6-aza-3,9,12,15-tetraoxaheptadecanoic Acid 489427-26-1
17-AAG 替拉替尼 75747-14-7
Ethynyl estradiol * 57-63-6
细胞冻存
1.将细胞消化下来,移入离心管离心,弃上清
2.准备冻存液比例:50%FBS+40%培养基+10%DMSO(现用现配)
3.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内.
放入-20度冰箱2-4小时后.再放入-80度冰箱过夜,第二天放入液氮罐保存
原则 慢冻速溶
4.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内。
冻存时间。放入4度冰箱10分钟。再放入-20度冰箱30分钟-1小时。不能超过1小时。zui后放入-80度冰箱过夜。第二天放入液氮中。