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QG-56肺扁平上皮癌细胞 上海谷研科技有限公司的原代细胞株及血清,ATCC细胞株、hyclone澳洲特级胎牛血清,优等胎牛血清,标准胎牛血清,gibco特优级胎牛血清血清,新生牛血清。
细胞术检测样品制备方法
直接标记抗体(FITC标记抗体)QG-56肺扁平上皮癌细胞:
(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞,800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。[2]
未标记抗体间接免疫荧光标记法:
(1)收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml PBS重悬细胞,800rpm离心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的PBS 重悬细胞,800rpm离心5min,洗去未结合一抗,重复一次。
(5)加入荧光标记(FITC)标记的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm离心5min,去上清,PBS洗涤两次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞;固定待测。
(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备:
(1)待测样本制成单细胞悬液,然后200g离心5分钟,弃上清。
(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小时。
(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升,取1毫升细胞悬液,用PBS洗三次,细胞重悬于1毫升PI染液中,37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)PI染液终浓度为50微克/毫升,RNase A终浓度为20微克/毫升。
其他*产品:
1-azidohexane 6926-45-0
1-Benzhydrylazetidin-3-one 1-二苯甲基氮杂环丁烷-3-酮 40320-60-3
1-BENZYL-3-METHYL-4-PIPERIDONE 1-苄基-3-甲基-4-哌啶酮 34737-89-8
1,4-dihydro-5H-tetrazol-5-one 16421-52-6
1,5-diMethyl-1H-indole-2-carbaldehyde 883526-76-9
1,5-Diphenyl-3-pentanone 5396-91-8
1,5-HEXADIENE-3-OL 1,5-己二烯-3-醇 924-41-4
1,5-Naphthalene Diisocyanate 萘二异氰酸酯 3173-72-6
1,5-naphthalenedisulfonate 美海屈林萘二磺酸盐 6153-33-9
1,5-Pentanediboronic acid pinacol ester 1,5-戊烷二硼酸二(频哪酯) 1073371-70-6
1,6-Bis(triMethoxysilyl)hexane 1,6-双*氧基硅基己烷 87135-01-1
5,6-DiMethylheptane-1,6-diaMine *基六亚甲基二肟 25620-58-0
1,6-DibroMonaphthalene 1,6-二溴萘 19125-84-9
1,6-HEXANEDIAMINE 1,6-已烷二胺 124-09-4
1,6-Hexanediylbis[MethylcarbaMic chloride 1,6-己烷二基双[甲基氨基甲酰氯] 99191-71-6
1,7-Dichloroheptan-4-one 1,7-二氯-4-庚酮 40624-07-5
1,7-Dinitronaphthalene 24824-25-7
1,8-DIAMINO-P-MENTHANE 4-氨基-α,α-4-*基-环己烷甲胺 80-52-4
1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯 6674-22-2
1,8-dihydroxy-3-Methylbenzo[a]anthracene-7,12-dione 7414-92-8
细胞冻存
1.将细胞消化下来,移入离心管离心,弃上清
2.准备冻存液比例:50%FBS+40%培养基+10%DMSO(现用现配)
3.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内.
放入-20度冰箱2-4小时后.再放入-80度冰箱过夜,第二天放入液氮罐保存
原则 慢冻速溶
4.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内。
冻存时间。放入4度冰箱10分钟。再放入-20度冰箱30分钟-1小时。不能超过1小时。zui后放入-80度冰箱过夜。第二天放入液氮中。