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SPC-A-1肺腺癌细胞 上海谷研科技有限公司的原代细胞株及血清,ATCC细胞株、hyclone澳洲特级胎牛血清,优等胎牛血清,标准胎牛血清,gibco特优级胎牛血清血清,新生牛血清。
细胞术检测样品制备方法
直接标记抗体(FITC标记抗体)SPC-A-1肺腺癌细胞:
(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞,800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。[2]
未标记抗体间接免疫荧光标记法:
(1)收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml PBS重悬细胞,800rpm离心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的PBS 重悬细胞,800rpm离心5min,洗去未结合一抗,重复一次。
(5)加入荧光标记(FITC)标记的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm离心5min,去上清,PBS洗涤两次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞;固定待测。
(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备:
(1)待测样本制成单细胞悬液,然后200g离心5分钟,弃上清。
(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小时。
(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升,取1毫升细胞悬液,用PBS洗三次,细胞重悬于1毫升PI染液中,37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)PI染液终浓度为50微克/毫升,RNase A终浓度为20微克/毫升。
其他*产品:
1-aMinopyrrolidin-2-one, hydrochloride 1-氨基吡咯烷-2-酮盐酸盐 20386-22-5
1-Azabicyclo[2.2.2]octan-3-aMine,Monohydrochloride, (3S)- (9CI); 137661-30-4
1-Azabicyclo2.2.2octan-4-ol 26458-74-2
1-Azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylicacid,7-oxo-,(2S,5R)-(9CI) 112419-10-0
1-Azetidinecarboxylic acid, 3-(carboxyMethoxy)-, 1-(1,1-diMethylethyl) 3-(羧基甲氧基)-1-氮杂环丁烷羧酸叔丁酯 889952-83-4
1-AZIDO-3,6,9-TRIOXAUNDECANE-11-OL 86770-67-4
1,8-dihydroxy-4,5- bis(MethylaMino)anthraquinone 56524-76-6
1,8-DIHYDROXYNAPHTHALENE 1,8-二羟基萘 569-42-6
1,8-Naphthalenediboronic acid 947617-22-3
1,8-Naphthosultone 1,8-萘磺酸内酯 83-31-8
1,8-Naphthyridin-2-butyric acid 886362-95-4
1,9-DICHLORONONANE 1,9-二氯壬烷 821-99-8
1,9-HEPTADECADIENE-4,6-DIYNE-3,8-DIOL 福尔卡烯炔二醇 55297-87-5
1.0Kg 3-氯-2-氯甲基丙烯 1871-57-4
1-[(2-[DIETHYLAMINO]ETHYL)AMINO]-4-[HYDROXYMETHYL]-9H-THIOXANTHEN-9-ONE 海恩酮 3105-97-3
1-[(2S)-Tetrahydro-2-furanyl]ethanone 1-[(2S)-四氢-2-呋喃基]乙酮 131328-27-3
1-[(4-chloro-2-nitrophenyl)azo]-2-naphthol 6410-13-5
1-[(Benzyloxy)carbonyl]-3-piperidinecarboxylic acid (R)-N-Cbz-3-哌啶甲酸 78190-11-1
1-[(Benzyloxy)carbonyl]piperidine-4-carboxylic acid N-Cbz-哌啶-4-羧酸 10314-98-4
1-[(Methylthio)Methyl]ethyl acetate 74586-09-7
1-[[4-(3-Methoxypropoxy)-3-Methyl-2-pyridinyl]Methyl]-2-[[[4-(3-Methoxypropoxy)-3-Methyl-2-pyridinyl]Methyl]sulfinyl]-1H-benziMidazole 2-{[4-(3-甲氧基丙氧基)-3-甲基吡啶-2-基]甲亚磺酰基}-1-[4-(3-甲氧基丙氧基)-3-甲基吡啶-2-基]甲基苯并咪唑 935260-92-7
Ethanone, 1-[4-(aMinoMethyl)phenyl]- (9CI) 1-[4-(氨基甲基)苯基]-乙酮 87171-25-3
细胞冻存
1.将细胞消化下来,移入离心管离心,弃上清
2.准备冻存液比例:50%FBS+40%培养基+10%DMSO(现用现配)
3.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内.
放入-20度冰箱2-4小时后.再放入-80度冰箱过夜,第二天放入液氮罐保存
原则 慢冻速溶
4.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内。
冻存时间。放入4度冰箱10分钟。再放入-20度冰箱30分钟-1小时。不能超过1小时。zui后放入-80度冰箱过夜。第二天放入液氮中。