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HGC-27胃癌细胞未分化上海谷研科技有限公司的原代细胞株及血清,ATCC细胞株、hyclone澳洲特级胎牛血清,优等胎牛血清,标准胎牛血清,gibco特优级胎牛血清血清,新生牛血清。
细胞术检测样品制备方法
直接标记抗体(FITC标记抗体)HGC-27胃癌细胞未分化:
(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞,800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。[2]
未标记抗体间接免疫荧光标记法:
(1)收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml PBS重悬细胞,800rpm离心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的PBS 重悬细胞,800rpm离心5min,洗去未结合一抗,重复一次。
(5)加入荧光标记(FITC)标记的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm离心5min,去上清,PBS洗涤两次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞;固定待测。
(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备:
(1)待测样本制成单细胞悬液,然后200g离心5分钟,弃上清。
(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小时。
(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升,取1毫升细胞悬液,用PBS洗三次,细胞重悬于1毫升PI染液中,37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)PI染液终浓度为50微克/毫升,RNase A终浓度为20微克/毫升。
其他*产品:
1-[4-(BROMOMETHYL)PHENYL]-1H-PYRAZOLE 1-ó4-(溴甲基)苯-1H-吡唑 368869-85-6
1-[4-AMino-7-(3-hydroxypropyl)-5-(4-Methylphenyl)-7H-pyrrolo[2,3-d]pyriMidin-6-yl]-2-chloro-ethanone 821794-90-5
10 -100 g 涕灭威(铁灭克) 116-06-3
10 g 164112-72-5
10 g 阿瓦斯丁 216974-75-3
DIALLYL CHLOROPHOSPHATE 16383-57-6
10 GM and 25 GM 松萝酸 125-46-2
10 GM and 25 GM 131436-22-1
FosMidoMycin 膦胺霉素 66508-53-0
TREMULACIN 29836-40-6
10-(T-BOC-AMINO)-1-DECYLBROMIDE 887353-29-9
10,10'-DibroMo-9,9'-bianthryl 10,10'-二溴-9,9'-联二蒽 121848-75-7
10,10-DiMethylanthrone 10,10-二甲基蒽酮 5447-86-9
10,11-DIHYDRO-5H-BENZO[E]PYRROLO[1,2-A][1,4]DIAZEPINE 10,11-二氢-5H-吡咯并[2,1-C][1,4]苯并二氮杂环庚烷 22162-53-4
100 graM 3-(2-)吡咯烷 885277-67-8
PIGMENT RED 83 颜料红 83 [CI 58000] 104074-25-1
Lineatin (+/-)-3,3,7-*基-2,9-二氧杂三环[3.3.1.04,7]壬烷 65035-34-9
2-[(triMethoxysilyl)Methyl]butane-1,4-diaMine 6037-49-6
100Mg 125229-62-1
100Mg p-壬基苯胺 37529-29-6
10-25Mg 5302-45-4
3-HYDROXYOCTADECANOIC ACID 3-羟基十八烷酸 45261-96-9
106120-04-1 106120-04-1
10-Deacetylbaccatin III 10-脱乙酰基巴卡丁 III 32981-86-5
细胞冻存
1.将细胞消化下来,移入离心管离心,弃上清
2.准备冻存液比例:50%FBS+40%培养基+10%DMSO(现用现配)
3.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内.
放入-20度冰箱2-4小时后.再放入-80度冰箱过夜,第二天放入液氮罐保存
原则 慢冻速溶
4.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内。
冻存时间。放入4度冰箱10分钟。再放入-20度冰箱30分钟-1小时。不能超过1小时。zui后放入-80度冰箱过夜。第二天放入液氮中。