Pfu DNA Polymerase说明书

货号                                                  规格

PE006-01                                          100ul   x 1 （250 U）

PE006-05                                          100ul  x 5 （1250U）

PE006-10                                          100ul x 10 （2500U）

保存：-20℃

运输：2-8℃

【产品概述】

Pfu DNA Polymerase 是将克隆有Pyrococcus furiosis （激烈火球菌） 的DNA Polymerase基因在大肠杆菌中重组表达，经多次柱层析纯化而获得的高纯度耐热DNA Polymerase。该酶具有5’3’ DNA 聚合酶活性和3’5’的外切酶活性（即校读活性），能够纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配现象，其保真度是Taq DNA Polymerase的6倍左右，适用于对保真性要求较高的DNA片段的扩增，如基因克隆、测序、定点突变、SNP分析等，也可用于DNA片段的末端补平。使用扩增得到的PCR产物无3’端突出碱基，不可直接用于TA克隆。

【产品组分】

（2.5 U/μl）100 μl

10 x Pfu PCR Buffer 1 ml

【保存条件】

-20℃恒温保存一年

【活性定义】

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃、30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量定义为1个活性单位（U）。

【注意事项】

1. 具有3’5’的外切酶活性，故扩增时延伸速度比Taq DNA Polymerase低，约为2 min/1 kb，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间。

2. 的3’5’的外切酶活性可降解引物，用酶量过多会导致引物部分或*降解，电泳检测时产生弥散带型或无扩增产物。故在反应体系中应先加dNTP，再加酶，并立即进行PCR反应。

3. 用扩增时，引物长度应大于18个碱基，Tm在55~80℃之间，引物浓度在0.1~0.5 μM之间，比Taq酶略高。

4. 比Taq DNA Polymerase的热稳定性好，95℃ 下1小时仍可保持90%以上的活性。因此对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对的活性无影响。

5. 对质粒DNA模板的扩增上限为10 kb，基因组DNA模板的扩增上限约为6kb。但通常对4 kb以上片段的扩增效率明显降低，故在扩增对保真性要求较高的长片段时，可使用HiFiTaq DNA Polymerase，其保真度是的3/4，是Taq DNA Polymerase的4~6倍。

6. 的PCR产物经过纯化后，可直接与经去磷酸化的平末端目标载体连接，也可先连接到线性平末端克隆载体上，再经亚克隆转移至目标载体。如果需要与线性T载体连接，应首先向PCR产物的3’端添加A碱基。

【使用方法】

用户需自备的试剂：DNA模板、引物、dNTP Mix、ddH2O

操作示例：

1．PCR反应体系的建立：冰上配制下列反应 2. PCR反应循环的设置：

DNA模板 1 μl 94~98℃ 2 min

10 x Pfu PCR buffer 5μl 94~98℃ 30 sec

25mM MgSO4 3-5 μl 55~65℃ 30 sec 25~35循环

10 mM dNTP Mix 1 μl 72℃ 2min/1 kb

正向引物 （10 μM） 1 μl 72℃ 5 min

反向引物 （10 μM） 1 μl

Pfu DNA polymerase （2.5 U/μl ） 1~3 μl

ddH2O 补足至50 μl

 模板量：10~1000 ng基因组DNA，1~30 ng质粒，或1~2 μl RT-PCR反应后的cDNA

注意：以上举例为常规PCR反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、引物、目的片段的特点设定*反应条件，并根据比例放大或缩小反应体系。

3. 结果检测：取2 μl反应液电泳观察结果。

【备注】

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。在所有情况下，本公司对此产品所承担的责任，*于此产品的价值本身。