细胞名称：人小细胞肺癌细胞，NCI-H446细胞

人小细胞肺癌细胞，NCI-H446细胞

传代方法：
收到细胞后，在倒置显微镜下观察细胞生长状态：如果没长满，将培养瓶用75%酒精消毒后在超净台内更换新鲜培养液，继续培养。
如果细胞已经长满（约80%-90%）则传代后继续培养。

贴壁细胞传代方法：
1 弃去培养基，用不含钙、镁离子的PBS 洗1-2 次。
2 加1ml 0.25%的*（含0.02%EDTA），让*与大部分细胞接触后放入37℃培养箱内，随时观察细胞状态变化，待细胞大部分变圆后加*培养基终止消化。

悬浮细胞传代方法：
可以直接传代也可以离心法传代。
1.直接传代是让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2-2/3，吹打细胞形成细胞悬液后，分别接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。
2.离心法传代是将细胞连同培养液一并转移到离心管内，1000rpm，5 分钟，去除上清，加新的培养液到离心管内，吹打细胞形成细胞悬液后，分别接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。一般没有特殊说明，细胞一般是一传二。

冻存方法：
90%FBS，10%DMSO，现用现配。
储存：液氮中*保存。
注：1 观察细胞在低倍镜下观察，便于整体估计细胞密度。
    2.在运输过程中可能会导致一些贴壁不牢的细胞发生部分脱落，可离心吹打后重新种入瓶中培养。
    3.收到细胞后若发现培养瓶破损、细胞污染等，请尽快与我们。

常见问题及解决方案：
1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞*可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

我公司还可提供一下细胞株：