大鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒
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在大鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒实验中我们需要注意一些实验误差的问题,下面就是为实验减少误差的具体操作步骤:
1.实验使用前,将所有试剂充分摇匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免在实验加样时加入大量的气泡,实验时在加样上产生误差。
2.根据待检测样品的数量加上标准品的数量决定所需要使用的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品需根据自己的数量来定,如在实验中能使用复孔的则尽量做复孔。
3.将稀释好后的标准品50ul加入反应孔、并加入待测样品50ul在反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡使其均匀,在37℃的条件下温育1小时。
4.以上实验结束后即甩去孔内的液体,每孔均加满洗涤液,振荡30秒后,甩去孔内的洗涤液,用吸水纸拍干。重复操作3次即可。如果用洗板机洗涤,洗涤次数则需增加一次。
5.在每孔中加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡使其摇匀,在37℃的条件下温育30分钟。
6.将孔内的液体甩去,将每个孔中加满洗涤液,振荡30秒后,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7. 将每个孔中均加入底物A、B各50ul,轻轻振荡摇匀,在37℃的条件下温育10分钟。注意:避免光照。
8.在取出酶标板时,即迅速加入50ul终止液,加入终止液后立即测定结果。
9.zui后即在450nm波长处测定各孔的OD值。
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