大鼠磷酸化AKT蛋白（P-AKT）ELISA试剂盒
时间：2015-03-09 阅读：260
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上海远研生物科技有限公司 -
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大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
l 本试剂盒仅供科研使用。
l 本试剂盒用于体外定量检测大鼠血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)的含量。
l 有效期：6个月
l 保存条件：2-8℃
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)水平。用纯化的大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT),再与HRP标记的大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠磷酸化AKT蛋白(P-AKT)浓度。
试剂盒组成
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | R.T. |
封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | R.T. |
密封袋 | 1个 | 1个 | R.T. |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品：180pg/ml | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃保存 |
样本处理及要求
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。