【中文名称】：猪羟*糖蛋白(HRGP)ELISA试剂盒

【英文名称】：Pig hydroxyproline glycoprotein (HRGP) ELISA kit

【产品规格】:96T/48T

【保存条件】：2-8℃低温保存

【保质期】：6个月，所有试剂盒均提供批次。

【试剂盒成分】：酶标板，试剂，标准品等。 

用于科研方面，不用于临床诊断

猪羟*糖蛋白(HRGP)ELISA试剂盒注意事项：

　　1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温均衡15-30分钟后方可运用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3. 各步加样均应使用加样器，并常常校对其准确性，以避免实验误差。一次加样时日控制在5分钟内，如标本数量多，举荐使用排枪加样。

　　4. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样板OD值大于标准品孔*孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释必定倍数(n倍)后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免穿插污染。

猪羟*糖蛋白(HRGP)ELISA试剂盒作步骤

　　1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1200pg/ml，800pg/ml ，400pg/ml，200pg/ml，100pg/ml)。

　　2. 加样：分别设空白孔(空白比照孔不加样品及酶标试剂，其他各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不涉及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4. 配液：将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

　5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7. 温育：操作同3。

　　8. 洗涤：操作同5。

　　9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

　　10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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