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新技术介绍之转染技术

时间:2014-09-25      阅读:979

导读:在技术革新中,研究成功不是基于试验次数和资料收集得多少,往往是研究方法和研究技术的革新带来的,细胞学家一般研究是把外源分子送入细胞内,现如今有一种叫做转染技术的新技术出现,本文就是对转染技术进行介绍。

       过去的研究认为在不考虑具体条件,LPEI/DNA 转染复合物的细胞毒性较低,有利于细胞定位,因此与BPEI相比应该转染效率高一些。但zui近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的转染复合物,从而提高转染效率,但同时细胞毒性也增大。超高分枝的、较柔性的PEI衍生物含有额外的仲胺基和叔胺基,在染实验中发现这种PEI的毒性低,但转染效率却较高。

       GNOME转染方案主要是通过短脉冲激光,在细胞膜上刺出微小的孔洞,使细胞外的分子能够扩散进入细胞质。研究者们尝试这一策略给细胞递送分子已经有十多年了,但传统方案的速度非常慢通量也很低。

       首先将细胞与直径约200+nm的金纳米颗粒共同孵育,让它们慢慢沉积到细胞上。三个小时之后,研究者们用短脉冲的绿色激光束照射样本。这一过程在研究者自制的自动化设备中进行,该设备带有能够移动培养皿的自动载物台和软件,以便快速照射样本。

       吸收了这些光之后,金颗粒中的电子会快速震荡并发热。研究者们还不*清楚之后发生了什么事件,不过结果是细胞膜上出现了孔洞。Heinemann的研究团队使用这一技术将siRNA引入了犬类的癌细胞系,对一个基因进行了有效的knocked+down。据估计,差不多有90%25的细胞被成功转染,处理之后的细胞超过80%25仍有活性。

       优势:GNOME转染非常温和,有很高的细胞活性,敏感细胞一般也能达到90%。

       相信不久的将来这种技术会更加活跃,相继出现转染技术的各种产品和各种新型研究方法。
 

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