小鼠Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)ELISA Kit        

【预期应用】ELISA 法定量测定血清、血浆、细胞培养物上清、组织裂解液中Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)     含量。

【产品性能指标】

1、检测范围：15.6 pg/ml-1000 pg/ml

2、灵敏度：3.9 pg/ml

3、精密度：批内差CV%<8%，批间差CV%<10%

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【实验原理】

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)     抗体的微孔中依次加入标本或标准品、

*化的抗Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)     抗体、HRP 标记的亲和素，经过*洗涤后用底物TMB 显色。TMB 在过

氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样本中的Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)     呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样本浓度。

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【试剂盒组成成分】

组份48T/96T

酶标板 (Assay plate) 12 条×8 孔

标准品 (Standard) 2 瓶 (冻干品)

*标记抗体 (Biotin-antibody) 1 x 120 μl/瓶 (100×)A

辣根过氧化物酶标记亲和素 (HRP-avidin) 1 x 120 μl/瓶 (100×)

*标记抗体稀释液 (Biotin-antibody Diluent) 1 x 15 ml/瓶

辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent) 1 x 15 ml/瓶

* (Sample Diluent) 1 x 50 ml/瓶

浓洗涤液 (Wash Buffer) 1 x 20 ml/瓶 (25×)

底物溶液 (TMB Substrate) 1 x 10 ml/瓶

终止液 (Stop Solution) 1 x 10 ml/瓶

板贴4

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【所需试剂和器材】

标准规格酶标仪；高速离心机；电热恒温培养箱；干净的试管和离心管；容量瓶；

系列可调节移液器及吸头；多通道移液器；蒸馏水等

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【样本采集及保存】

1、血清：全血标本请于室温放置2 小时或4°C 过夜后于2 - 8°C 1000 x g 离心15 分钟，取

上清即可立即检测；或进行分装，并将标本放于-20°C 或-80°C 保存，但应避免反复冻融。

解冻后的样品应再次离心，然后检测。

2、血浆：可用EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后30 分钟内于2 - 8°C 1000 g 离心15

分钟，取上清即可立即检测；或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反

复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。

3、细胞培养物上清：标本于2 - 8°C 1000 x g 离心15 分钟取上清，上清立即用于实验，或

分装后于-20°C 或-80°C 保存。避免反复冻融。

4、组织裂解液：取100mg 组织，用1X PBS 洗去血污。剪成小块放入组织研磨器（匀浆管）中，加入1 ml 1X PBS，制成匀浆，然后置于-20°C 过夜。经过反复冻融2 次处理破坏细

胞膜后，将组织匀浆于2 - 8°C 5000 g 离心5 分钟取上清。取适量上清液立即进行实验，

或将上清分装保存于-20°C 或-80°C 。解冻后的样本应再次离心，然后检测。避免反复冻

融。

注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

【试剂配制】

1、 标准品

(1) 从试剂盒中取出一支标准品，于6000-10000rpm 离心30 秒。用1ml *溶解，并

用吸头对准冻存管底部反复吸打5 次以助溶解，充分混匀得到标准品S7，放置备用。

(2) 取7 个1.5 ml 离心管(S0-S6)依次排列，各加入250μl *。吸取250μl 标准品

S7 到*个离心管中(S6)，轻轻吹打混匀。从S6 中吸取250μl 到第二个EP 管中(S5)，

轻轻吹打混匀。以此类推进行标准品的倍比稀释。S0 为*。

2、 洗液工作液

浓洗涤液按1:25倍用去离子水进行稀释。例如用量筒量取240ml去离子水，倒入烧杯或其

他洁净容器中，再量取10ml浓洗涤液，均匀加入，搅拌混匀，在临用前配妥。浓洗涤液低温保

存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3、 *标记抗体工作液

*标记抗体液按1:100倍用*标记抗体稀释液进行稀释。如10μl*标记抗体加

990μl*标记抗体稀释液，轻轻混匀，在临用前10分钟内配妥。

4、 辣根过氧化物酶标记亲和素工作液

辣根过氧化物酶标记亲和素按1:100倍用辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液进行稀释。如

10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液，轻轻混匀，在临用

前10分钟内配妥。

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【重要提示】

1、实验开始前，请提前配置好所有试剂。试剂或样本稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起

泡。

2、用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便管盖和管壁上的液体集中到

管底。

3、在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。

4、 因实际装量多于标示装量，配制工作试剂请用精准的计量工具（移液器或量筒等）量取，

切勿不经量取直接使用。

5、标准品、*标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液稀释前根据预先计算

好的每次实验所需的总量配制，实际配制时应多配制0.1-0.4ml。请勿重复使用已稀释过

的标准品、*标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。

6、标准品的稀释请勿于板中进行，标准品应于临用前15 分钟内配制。为保证实验有效性，

建议每次实验使用新的标准品。若保存得当，溶解后的标准品S7 可在2-8℃保存，7 天内

使用有效。

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【操作步骤】

1、将各种试剂移至室温（18-25℃）平衡至少30 分钟，按前述方法配制试剂，备用。

2、加样：分别设标准品孔、待测样本孔。每孔分别加标准品或待测样本100μl，轻轻晃动混

匀，覆上板贴，37℃温育2 小时。

3、弃去液体，甩干，不用洗涤。

4、每孔加*标记抗体工作液100μl，覆上新的板贴，37℃温育1 小时。

5、弃去孔内液体，甩干，洗板3 次。每次浸泡2 分钟，200μl/每孔，甩干。

6、每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液100μl，覆上新的板贴，37℃温育1 小时。

7、弃去孔内液体，甩干，洗板5 次。每次浸泡2 分钟，200μl/每孔，甩干。

8、依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色15-30 分钟。

9、依序每孔加终止溶液50μl，终止反应。

10、在反应终止后5 分钟内用酶标仪在450nm 波长依序测量各孔的光密度（OD 值）。

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【操作要点】

1、为保证检测结果的准确性，建议标准品及样本均设双孔测定。每次检测均需做标准曲线。

2、如标本中待测物质含量过高，请先用*进行稀释，以使样本符合试剂盒的检测范

围，zui后计算时再乘以相应的稀释倍数。

3、 加样：加样时，请使用一次性的洁净吸头，避免交叉污染。加样时应尽量轻缓，避免起泡，

将样本加于酶标板孔底部，切勿沿孔壁加样。一次加样时间控制在10 分钟内，如标

本数量多，*使用移液器加样。

4、 温育：为防止样本蒸发或污染，温育过程中酶标板必须覆上板贴，实验过程中酶标板应避

免处于干燥的状态。温育过程中应随时观察温箱温度是否恒定于37℃，及时调整。温育

过程中，温箱不易开启太多次，以免影响温度平衡。

5、 洗涤：洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。

(1) 手工洗板方法：吸去（不可触及孔壁和孔底）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺

垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将*的洗涤缓冲液按200μl/孔注入孔内，

浸泡2 分钟。根据操作步骤中所述，重复此过程数次。

(2) 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

6、 显色：为保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。可在加入底物溶

液后每隔一段时间观察一下显色情况以控制反应时间（比如每隔10 分钟）。当肉眼可见标

准品前3-4 孔有明显梯度蓝色，后3-4 孔显色不明显时，即可加入终止液终止反应，此时

蓝色立刻变为黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。

7、底物溶液应为浅蓝色或无色，如果颜色严重变深则必须弃用。底物溶液易受污染，请避光

妥善保存。

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【数据处理】

可将标准品及样本值减去S0 孔数值后绘制曲线，如果设置复孔，则应取其平均值计算。以标

准品的浓度为纵坐标（对数坐标），OD 值为横坐标（对数坐标），在对数坐标纸上绘出标准曲

线。*使用专业制作曲线软件进行分析，可从我们的下载专业软件"Curve Expert 1.3"，

并根据提示制作标准曲线。根据样本OD 值，由标准曲线查出相应的浓度；或用标准品的浓度

与 OD 值计算出标准曲线的回归方程式，将样本的OD 值代入方程式，计算出样本浓度。若样

本检测前进行过稀释，zui后计算时需乘以相应的稀释倍数，即为样本的实际浓度。

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【说明】

1、本试剂盒仅供研究使用。

2、中、英文说明书可能会有不*之处，请以英文说明书为准。

3、本操作说明也适用于48T 试剂盒。48T 试剂盒中酶标板、标准品、*标记抗体及辣根

过氧化物酶标记亲和素数量减半。

4、不同批号试剂不能混用。不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

5、刚开启的酶标板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何

影响。

上海逸研生物科技有限公司专业从事于elisa试剂盒的销售及elisa待测服务，代理国内外的elisa试剂盒，并自主研发常规elisa试剂盒，质量*，*，欢迎广大客户和订购，代理品牌：RD代理、eBioscinece代理、biovision代理、华美CUSABIO代理、优尔生代理、博士德代理等。

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