中性、碱性土壤*磷试剂盒说明书-齐一生物试剂盒
时间:2021-03-09 阅读:392
中性、碱性土壤*磷试剂盒说明书齐一生物
For Research Use only
仅供研究用
货号:QYS-236035
微量法 100管/96样
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定
中性、碱性土壤*磷试剂盒说明书齐一生物测定意义
*磷是土壤中可被植物吸收的磷组分,包括全部水溶性磷、部分吸附态磷及有机态磷,土
壤中*磷是限制植物生长主要因子之一。
测定原理
用弱碱法提取酸溶性磷和吸附态磷,钼蓝与磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物质,通过测定660nm 光吸收,即可计算磷含量。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、震荡仪。
试剂组成和配制
提取液:液体 125mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 5mL 双蒸水,溶解后 4℃保存一周。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 5mL 双蒸水,溶解后 4℃保存一周。
试剂三:液体 5mL×1 瓶,室温保存。
标准品:10μmol/mL 标准磷贮备液 1mL×1 支,4℃保存。工作液:35mL 棕色空瓶×1 瓶。
工作液(定磷剂)的配制:按 H2O:试剂一:试剂二:试剂三=2:1:1:1 的比例配制,配好的工作液应为浅黄色。若变色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,工作液应现配现用。
注意:配试剂用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
样本处理
新鲜土样风干,过 30-50 目筛,按照土壤质量(g):提取液体积(mL)为 1:20 的比例(建议
称取约 0.05g 土样,加入 1mL 提取液),振荡提取 1h,10000g ,25℃离心 10min,取上清液待测。
中性、碱性土壤*磷试剂盒说明书齐一生物测定步骤
1、 测定步骤:
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 660nm,蒸馏水调零。
2、 将 10μmol/mL 标准液用提取液稀释为 6、4、2、1、0.5、0.25μmol/mL 的标准溶液备用。
3、 操作表:(在 1.5mL 离心管中或 96 孔板依次加入下列试剂)
| 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样品(µL) | 20 | - | - |
标准溶液(µL) | - | 20 | - |
提取液(µL) | 40 | 40 | 60 |
工作液(µL) | 80 | 80 | 80 |
H2O(µL) | 60 | 60 | 60 |
充分混匀,25℃静置 30min,将液体置于微量玻璃比色皿/96 孔板中,测定 660nm处吸光值 A,分别记为 A 测定管、A 标准管和 A 空白管,△A=A 测定管-A 空白管,△A 标准=A 标准管-A 空白管,空白管只需测一次。 |
计算公式
1、 标准曲线的绘制:
以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的△A 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y=kx+b, 将△A 带入方程得到 x(μmol/mL)
2、 *磷含量的计算:
*磷含量(μmol /g 鲜重)=x×V 样÷(V 样×W÷V 样总)=x÷W。
V 样:加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g。
注意事项
1. 配好的显色液当天用完,变蓝则不能使用。
2. 低检出限为 0.2μg/mL。
中性、碱性土壤*磷试剂盒说明书齐一生物注:电子版说明书仅供参考、详情请参考试剂盒纸质版说明书。