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401次丙二醛(malondialdehyde)含量试剂盒说明书For Research Use only
仅供研究用
货号:QYS-23035
微量法 100 管/96 样
丙二醛(malondialdehyde)含量试剂盒说明书正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:
氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸,生成过氧化脂质;后者逐渐分解为一系列复杂的化合物,其中包括 MDA。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。
测定原理:
MDA 与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)缩合,生成红色产物,在 532nm 有zui大吸收峰,进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量;同时测定 600nm 下的吸光度,利用 532nm 与 600nm 下的吸光度的差值计算 MDA 的含量。
需自备的仪器和用品:
丙二醛(malondialdehyde)含量试剂盒说明书可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配置:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;试剂一:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;
注意事项:
临用前注意试剂一是否*溶解,如未溶解,可以 70℃-90℃加热,并振荡以促进溶解。
MDA 提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。2、血清(浆)样品:直接检测。
丙二醛(malondialdehyde)含量试剂盒说明书测定步骤:
1、吸取 0.3mL 试剂一于 1.5mL 离心管中,再加入 0.1mL 样本, 混匀。
2、95℃水浴中保温 30min(盖紧,防止水分散失),置于冰浴中冷却,10000g,25℃,离心10min。
3、吸取 200μL 上清液于微量石英比色皿或 96 孔板中,测定 532nm 和 600nm 处的吸光度,记为 A532 和 A600,ΔA= A532-A600。
MDA 含量计算:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)中 MDA 含量的计算:
MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样=25.8×ΔA
2、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算
(1)按照蛋白浓度计算
MDA 含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样)=25.8× ΔA ÷Cpr
需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
(2)按照样品质量计算
MDA 含量(nmol/g 鲜重)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)=25.8×ΔA ÷W
(3 ) 按照细菌或细胞密度计算:
MDA 含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)=0.0516×ΔA
V 反总:反应体系总体积, 4×10-4 L;ε:丙二醛摩尔消光系数,155×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)中 MDA 含量的计算:
MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样=51.6×ΔA
2、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算(1)按照蛋白浓度计算
MDA 含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样)=51.6×ΔA÷Cpr
需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。(2)按照样品质量计算
MDA 含量(nmol/g 鲜重)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)=51.6×ΔA÷W
(3 ) 按照细菌或细胞密度计算:
MDA 含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)=0.1032×ΔA
V 反总:反应体系总体积,4×10-4 L;ε:丙二醛摩尔消光系数,155×103 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。
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