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271次尿素氮(BUN)试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48样
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
尿素是生物体内含氮化合物分解的终产物,在尿酶催化下分解转化成氨。血液尿素氮是肾功
能的主要指标之一。
测定原理
在碱性条件下,尿酶水解尿素产生氨,氨与次氯酸反应生成氯胺,再与酚衍生物作用生成绿
色吲哚酚,在 630nm处有特征吸收峰。
尿素氮(BUN)试剂盒说明书 自备实验用品及仪器
天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
标准品:液体 1mL× 1 支,4℃保存。
试剂一:粉剂× 1 瓶,4℃避光保存,临用前加 10mL 蒸馏水充分溶解。
试剂二:液体 20mL× 1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 20mL× 1 瓶,4℃避光保存。
样品处理
1. 组织:按照质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入1mL
蒸馏水)加入蒸馏水,匀浆后于 25℃,10000g 离心 10min,取上清待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104
个):蒸馏水体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500
万细胞加入 1mL 蒸馏水),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,
总时间 3min) ;然后 4℃,10000g 离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清或其它液体:直接检测。
尿素氮(BUN)试剂盒说明书 测定操作
空白管 标准管 测定管
样品(μL) 100
标准品(μL) 100
H2O(μL) 100
试剂一(μL) 200 200 200
充分混匀,于 37℃反应10min
试剂二(μL) 350 350 350
试剂三(μL) 350 350 350
充分混匀,于 37℃显色10min,于 1mL 玻璃比色皿,双蒸水调零,测定 630nm处吸光值,
记为 A 空白管、A标准管和 A测定管
注意:空白管和标准管只需测定一次。
计算公式
1. 按样本质量计算
尿素氮含量(mg/g 鲜重)=
空白管 标准管
空白管 测定管
A - A
A - A
×C 标准品÷W
= 0.005×
空白管 标准管
空白管 测定管
A - A
A - A
÷W
2. 按细胞数量计算
尿素氮含量(mg/104
cell)=
空白管 标准管
空白管 测定管
A - A
A - A
×C 标准品÷细胞数量
= 0.005×
空白管 标准管
空白管 测定管
A - A
A - A
÷细胞数量
3. 按液体体积计算
尿素氮含量(mg/L)=
空白管 标准管
空白管 测定管
A - A
A - A
×C 标准品
=5×
空白管 标准管
空白管 测定管
A - A
A - A
C 标准品:标准品浓度,5mg/L;W:样品质量,g
注意事项
1. 配制好的试剂一在 2-8℃条件下可保存一周。
2. zui低检出限为 80μ g/L。
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