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葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)试剂盒

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葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)试剂盒说明书 
分光光度法  50 管/48 样 
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 
测定意义 
GOD (EC 1.1.3.4)广泛存在于动物、 和植物中, 催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并产生H2O2,
是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。 
测定原理 
GOD催化产生H2O2,过氧化物酶在有氧存在时催化H2O2分解产生的氧又将邻联茴香胺氧
化生成有色物质,颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。 
试验中所需的仪器和设备 
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸
馏水 
试剂的组成和配制 
提取液:液体60mL×1 瓶,4℃保存; 
试剂一:液体 40 mL×1 瓶,4℃保存; 
试剂二:液体 8 mL×1 瓶,4℃保存; 
试剂三:液体 2 mL×1 支,4℃保存; 
样品测定的准备   
组织处理:按照组织质量(g) :提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约0.1g组织,
加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 
血清(浆):直接检测。 
测定步骤 
1、 分光光度计预热 30min以上,调节波长至 500nm,蒸馏水调零。 
2、 GOD 检测工作液的配制:用时将试剂二和试剂三转移至试剂一中,充分混匀,待用;
用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。 
3、测定前将GOD 检测工作液在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴 10min以上。 
4、在 1mL玻璃比色皿中加入 40μL样本和 960μL工作液,立即混匀并计时,记录 500nm下
20s吸光值 A1和 1min20s后的吸光值 A2。计算 ΔA=A2-A1。 
GOD活力单位的计算 
1、血清(浆)GOD 活力的计算 
单位定义:每 mL血清(浆)每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。  
GOD(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109
]÷V样÷T=3333×ΔA 
2、动物组织GOD 活力的计算 
(1)按蛋白浓度计算 
单位定义:每 mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。 
GOD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109
]÷(V样×Cpr)÷T=3333×ΔA÷Cpr 
(2)按样本鲜重计算 
葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)试剂盒单位定义:每 g组织每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。 
GOD(nmol/min/ g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109
]÷(W ×V样÷V样总)÷T=3333×ΔA÷W 
V反总:反应体系总体积, 1×10-3
 L; ε: 氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数, 7.5×103
 L / mol /cm;
d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.04 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;
T:反应时间,1 min;  Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。 

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