(AFT)ELISA试剂盒齐一生物科技（上海）有限公司专业经营ELISA试剂盒产品种类齐全、质量可靠、*、灵敏度高、效果稳定、易保存、操作简单。到货快、确保每一个ELISA试剂盒质量。凡是购买我公司ELISA试剂盒免费代测、提供技术服务、5个工作日出实验结果。欢迎新老客户前来：  ！

(AFT)ELISA试剂盒FOR RESEARCH USE ONLY

Drug Names

Generic Name：

(AFT)ELISA试剂盒

      This kit can be used for determination of serum, plasma and liquid samples Organization Content.

The experimental principle:

The product levels were measured in samples of the kit by double antibody sandwichmethod. The product with the purified antibody coated microtiter plate, made of solid phase antibody, to package is the product antigen monoclonal antibodies are then added to the micropores, the product and then with HRP labeled antibody binding, the formation of antibody - antigen - antibody complex enzyme label, after thorough washing with TMB chromogenic substrate. TMB in the HRP enzyme catalytic conversion into the blue, and in the action of acid into the final yellow. This product is positively related to the depth of color and in the samples. Instrument measured absorbance in the 450nm wavelength with ELISA (OD), the product concentration in the samples was calculated by standard curve.

Materials provided with the kit

Specimen requirements

• serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20 mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.
• cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidly frozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS（PH7.4）, Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant.
• extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant literature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.
• Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.

Assay procedure

1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution 50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separay. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50μl from the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density: 240ng/L,160ng/L ,80ng/L,40ng/L, 20ng/L)

2.add sample：Set blank wells separay (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.

3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.

4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.

5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.

6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except  blank well. 

7.incubate：Operation with 3.

8.washing：Operation with 5.

9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃

10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).

11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.

Important notes

• The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes in the room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.
• washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolve when dilute . Washing does not affect the result.
• add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids the experimental error. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .
• if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the first standard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.
• Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.
• The substrate evade the light preservation.
• Please according to use instruction strictly, The test result determination must take the microtiter plate reader as a standard.
• All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective material process.
• Do not mix reagents with those from other lots.

Calculate：

Take the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.

(AFT)ELISA试剂盒Storage and validity

1．Storage：  2-8℃.

2．validity： six months.

(AFT)ELISA试剂盒其它产品

编号    品名    制作工艺    规格    单位    质量标准    适用范围
A0101    胎牛血清
（无菌采制）    系采用健康母牛怀孕的八月龄胎牛血液为原料，经无菌采集、批量混合、分装而成    100    ml    内毒素含量低于5EU/ml，克隆形成率≥90%。    用于细胞株的保藏及娇贵细胞株培养。
A0102            125    ml        
A0103            200    ml        
A0104            250    ml        
A0105            400    ml        
A0106            500    ml        
A0201    特级新生牛血清（无菌采制）    系采用出生12小时内的健康新生牛血液为原料，经无菌采集、批量混合、分装而成。    100    ml    符合2010年版《中国药典》内毒素含量低于5EU/ml，细胞倍增时间＜17 h    主要用于原代细胞培养、传代细胞培养及病毒疫苗的研制和生产。
A0202            125    ml        
A0203            200    ml        
A0204            250    ml        
A0205            400    ml        
A0206            500    ml        
A0301    优级新生牛血清（无菌采制）    系采用出生16小时内的健康新生牛血液为原料，经无菌采集、批量混合、分装而成。    100    ml    符合2010年版《中国药典》内毒素含量低于5EU/ml，细胞倍增时间＜18 h。    主要用于原代细胞培养、传代细胞培养及病毒疫苗的研制和生产。
A0302            125    ml        
A0303            200    ml        
A0304            250    ml        
A0305            400    ml        
A0306            500    ml        
A0401    标准新生牛血清（无菌采制）    系采用出生20小时内的健康新生牛血液为原料，经无菌采集、批量混合、分装而成。    100    ml    符合2010年版《中国药典》内毒素含量低于10EU/ml，细胞倍增时间＜18 h。    主要用于原代细胞培养、传代细胞培养及病毒疫苗的研制和生产
A0402            125    ml        
A0403            200    ml        
A0404            250    ml        
A0405            400    ml        
A0406            500    ml        
用法：血清由冰冻状态在常温下*融化成液体，摇均匀后放置10-30分钟待结块蛋白质沉底后即可使用。
注意事项：有少量蛋白质结块析出不影响使用。未融化或融化未经摇匀的血清禁止直接放入高温水浴内加温。减少血清重复冻融。血清在室温或4℃冰箱内放置过久会影响促细胞生果。
保存：-10℃～-30℃
有效期：五年玉米黄质
Zeaxanthin    玉米黄质Zeaxanthin    5%    HPLC

    玉米黄质Zeaxanthin    10%    
    玉米黄质Zeaxanthin    20%    
        25%    
        50    
千层塔草提取物    石杉碱甲    1%    HPLC
        5%    
        99%    
七叶皂甙或
七叶皂苷Aescin    20%七叶皂甙/苷Aescin    20%    UV
    20%七叶皂甙/苷Aescin        HPLC
    40%七叶皂甙/苷Aescin    40%    UV
    96%七叶皂甙/苷Aescin    96-104%    滴定法
    98%七叶皂甙/苷Aescin    97-103%    
七叶皂苷钠
Sodium Aescinate    七叶皂苷钠
Sodium Aescinate    ≥88%    HPLC
        ≥90%    HPLC
        Aescinate 97-103%    滴定法
熊果酸
Ursolic acid    熊果酸
Ursolic acid    25%；50%；80%；90%；95%；98%。    HPLC
刺五加提取物    甙(E加B)    ≥0.8%
    HPLC
        ≥1.0%    
        ≥1.2%    
人参皂甙    皂甙    ≥80%    UV（紫外）
丹酚酸B        10%-70%    HPLC
盐酸青藤碱        98%    HPLC
厚朴总酚        95%    HPLC
柚皮甙        98%    HPLC
辛弗林        98%    HPLC