FOR RESEARCH USE ONLY鱼类白介素1αELISA试剂盒

Drug Names

Generic Name：鱼类白介素1αELISA试剂盒

      This kit can be used for determination of serum, plasma and liquid samples Organization Content.

The experimental principle:

The product levels were measured in samples of the kit by double antibody sandwichmethod. The product with the purified antibody coated microtiter plate, made of solid phase antibody, to package is the product antigen monoclonal antibodies are then added to the micropores, the product and then with HRP labeled antibody binding, the formation of antibody - antigen - antibody complex enzyme label, after thorough washing with TMB chromogenic substrate. TMB in the HRP enzyme catalytic conversion into the blue, and in the action of acid into the final yellow. This product is positively related to the depth of color and in the samples. Instrument measured absorbance in the 450nm wavelength with ELISA (OD), the product concentration in the samples was calculated by standard curve.

Materials provided with the kit

Specimen requirements

• serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20 mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.
• cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidly frozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS（PH7.4）, Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant.
• extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant literature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.
• Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.

Assay procedure

1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution 50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separay. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50μl from the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density: 240ng/L,160ng/L ,80ng/L,40ng/L, 20ng/L)

2.add sample：Set blank wells separay (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.

3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.

4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.

5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.

6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except  blank well. 

7.incubate：Operation with 3.

8.washing：Operation with 5.

9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃

10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).

11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.

Important notes

• The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes in the room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.
• washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolve when dilute . Washing does not affect the result.
• add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids the experimental error. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .
• if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the first standard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.
• Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.
• The substrate evade the light preservation.
• Please according to use instruction strictly, The test result determination must take the microtiter plate reader as a standard.
• All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective material process.
• Do not mix reagents with those from other lots.

Calculate：

Take the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.

鱼类白介素1αELISA试剂盒Storage and validity

1．Storage：  2-8℃.

2．validity： six months.

鱼类白介素1αELISA试剂盒其它产品Mouse Anti-Human CD284, Biotinylated    DS-MB-00577    100 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00577.pdf            Mouse Monoclonal    Flow Cytometry    Biotin
Mouse Anti-Human CD284, low endotoxin    DS-MB-00578    500 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00578.pdf            Mouse Monoclonal    Western Blot, Flow Cytometry, Functional Assay, Immunoprecipitation    Low Endotoxin
Mouse Anti-Human CD284    DS-MB-00580    100 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00580.pdf            Mouse Monoclonal    Western Blot, Flow Cytometry, Immunoprecipitation    
Rat Anti-Porcine CD2a    DS-MB-00583    0.25 mL    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00583.pdf            Rat Monoclonal    Frozen Tissue IHC, Cytotoxic Assay    Ascites
Mouse Anti-Human CD305, low endotoxin    DS-MB-00586    500 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00586.pdf            Mouse Monoclonal    Western Blot, Flow Cytometry, Functional Assay, Immunoprecipitation    Low Endotoxin
Mouse Anti-Human CD305    DS-MB-00588    100 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00588.pdf            Mouse Monoclonal    Western Blot, Flow Cytometry, Immunoprecipitation    
Mouse Anti-Human CD305, azide-free    DS-MB-00589    1 mg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00589.pdf            Mouse Monoclonal    Western Blot, Flow Cytometry, Functional Assay, Immunoprecipitation    Azide Free
Mouse Anti-Sheep CD31, FITC-labeled    DS-MB-00592    100 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00592.pdf            Mouse Monoclonal    Flow Cytometry    FITC
Mouse Anti-Sheep CD31    DS-MB-00593    250 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00593.pdf            Mouse Monoclonal    Flow Cytometry, Immunoprecipitation    
Mouse Anti-Rat CD31, Biotinylated    DS-MB-00594    100 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00594.pdf            Mouse Monoclonal    Flow Cytometry    Biotin
Mouse Anti-Rat CD31, low endotoxin    DS-MB-00595    500 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00595.pdf            Mouse Monoclonal    Direct ELISA, Western Blot, Flow Cytometry, Frozen Tissue IHC    Low Endotoxin
Mouse Anti-Rat CD31, FITC-labeled    DS-MB-00596    100 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00596.pdf            Mouse Monoclonal    Flow Cytometry    FITC
Mouse Anti-Rat CD31, FITC-labeled    DS-MB-00597    50 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00597.pdf            Mouse Monoclonal    Flow Cytometry    FITC
Mouse Anti-Rat CD31, FITC-labeled    DS-MB-00598    500 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00598.pdf            Mouse Monoclonal    Flow Cytometry    FITC
Mouse Anti-Rat CD31    DS-MB-00599    250 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00599.pdf            Mouse Monoclonal    Direct ELISA, Western Blot, Flow Cytometry, Frozen Tissue IHC    Purified
Mouse Anti-Rat CD31    DS-MB-00600    100 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00600.pdf            Mouse Monoclonal    Direct ELISA, Frozen Tissue IHC, Flow Cytometry    Purified
Hamster Anti-Mouse CD31, azide-free    DS-MB-00604    500 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00604.pdf            Hamster Monoclonal    Flow Cytometry, Functional Assay    Azide Free
Mouse Anti-Human CD31, azide-free    DS-MB-00608    1 mg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00608.pdf            Mouse Monoclonal    Flow Cytometry, Immunoprecipitation    Azide Free
Mouse Anti-Porcine CD31, FITC-labeled    DS-MB-00609    100 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00609.pdf            Mouse Monoclonal    Flow Cytometry    FITC
Mouse Anti-Porcine CD31    DS-MB-00610    250 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00610.pdf            Mouse Monoclonal    Frozen Tissue IHC, Flow Cytometry, Immunoprecipitation    Purified
Mouse Anti-Porcine CD31    DS-MB-00612    2 mL    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00612.pdf            Mouse Monoclonal    Frozen Tissue IHC, Flow Cytometry    Neat
Mouse Anti-Human CD31    DS-MB-00614    100 µL    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00614.pdf            Mouse Monoclonal    Paraffin-embedded IHC    Neat
Mouse Anti-Human CD32    DS-MB-00619    200 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00619.pdf            Mouse Monoclonal    Frozen Tissue IHC, Flow Cytometry, Immunoprecipitation    Purified
Mouse Anti-Human CD32, azide-free    DS-MB-00622    1 mg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00622.pdf            Mouse Monoclonal    Paraffin-embedded Tissue IHC, Frozen Tissue IHC, Flow Cytometry, Functional Assay    Azide Free
Rat Anti-Mouse JAM-1 / CD321 , Biotinylated    DS-MB-00626    100 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00626.pdf            Rat Monoclonal    Flow Cytometry    Biotin
Rat Anti-MouseJAM-1 / CD321    DS-MB-00627    100 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00627.pdf            Rat Monoclonal    Frozen Tissue IHC, Flow Cytometry, Immunoprecipitation    Purified
Rat Anti-Mouse CD322    DS-MB-00631    250 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00631.pdf            Rat Monoclonal    Frozen Tissue IHC, Flow Cytometry    Purified
Rat Anti-Mouse CD322, FITC-labeled    DS-MB-00633    100 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00633.pdf            Rat Monoclonal    Flow Cytometry    FITC
Rat Anti-Mouse CD322, azide-free    DS-MB-00634    1 mg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00634.pdf            Rat Monoclonal    Frozen Tissue IHC, Flow Cytometry, Functional Assay    Azide Free
Mouse Anti-Human CD324    DS-MB-00635    1 mL    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00635.pdf            Mouse Monoclonal    Western Blot, Frozen Tissue IHC    Purified
Mouse Anti-Human CD326, azide-free    DS-MB-00638    100 µg    http://www.raybiotech.com/manual/antibody/DS-MB-00638.pdf            Mouse Monoclonal    Western Blot, Paraffin-embedded Tissue IHC, Frozen Tissue IHC, Immunoprecipitation    Azide Free