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玻璃奶DNA快速纯化回收试剂盒■ 产品简介
利用特殊玻璃微珠吸附DNA的特性,可快速、高效地纯化、回收 DNA。与传统的低熔点琼脂糖和PEG回收DNA方法相比, 此试剂盒有以下特点:
快速:整个操作过程可在30-45分钟内完成。
高效:常规操作, 回收率zui高可达80%左右。
高纯:不含盐、蛋白质、RNA等杂质, 纯度与CsCl密度梯度离心相仿。
广泛:可以回收100bp-20,000bp的DNA片段。
100bp DNA片段的回收率>60%
200bp-20Kb DNA片段的回收率可达70%-80%
20Kb以上 DNA片段回收率可达50%
多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。
简便:仅在单个Eppendorf管中操作, 易于掌握。
安全:不接触酚、氯仿等有害物质。
欢迎广大客户咨询,齐一生物: 程 . . .
玻璃奶DNA快速纯化回收试剂盒规格
玻璃奶 3ml
溶胶液 120ml
漂洗液W2 3×15ml
洗脱缓冲液TE 15ml
说明书 1 份
选配试剂:
3M乙酸钠(pH 5.2)
储存条件:
本试剂盒在室温(15–25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长
时间的保存可置于2–8℃。(注意:当低温贮存时,使用前应先将试剂
盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在 37℃水浴中预热 10
分钟,以平衡溶液温度)。玻璃奶应储存在-20℃,防止沉淀,可反复
冻融。
规格
产品简介:
利用特殊玻璃微珠吸附DNA的特性, 可快速、高效地纯化、回收
DNA。与传统的低熔点琼脂糖和PEG回收DNA方法相比, 此试剂盒有以
下特点:
快速:整个操作过程可在30-45分钟内完成。
高效:常规操作, 回收率zui高可达80%左右。
高纯:不含盐、蛋白质、RNA等杂质, 纯度与CsCl密度梯度离心
相仿。
广泛:可以回收100bp-20,000bp的DNA片段。
100bp DNA片段的回收率>60%
200bp-20Kb DNA片段的回收率可达70%-80%
20Kb以上 DNA片段回收率可达50%
多样:可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。
简便:仅在单个Eppendorf管中操作, 易于掌握。
安全:不接触酚、氯仿等有害物质。
规格注意事项:请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1 溶胶液中含有 pH 指示剂,为黄色时,指示 pH≤7.5。若实验过程
中溶液颜色发生变化,请使用 5-10µl 3M 乙酸钠(pH 5.2)将溶
液的颜色调为黄色后再进行后续操作。(溶胶液中含有pH指示剂,
当 pH≤7.5 时溶液的颜色为黄色,此时 DNA 才能够*有效的与
膜结合,当 pH 值偏高时溶液的颜色变为桔红色和紫色,需要进行
调整。)
2 使用之前请按照瓶体标签提示在漂洗液W2中加入无水乙醇。
3. 玻璃奶在使用前务必混匀;特别是有沉淀产生时,应振荡或吹打至
沉淀消失。
规格操作步骤:
一、从普通琼脂糖凝胶中回收DNA片段
1. 待回收的DNA片段经电泳分离后, 从琼脂糖凝胶上切下所需DNA
片段, 放在1.5ml Eppendorf管中。
2. 加入2倍(请准确估量凝胶的体积!)体积的溶胶液(如果凝胶重为0.1
g,其体积可视为100 µl,则加入200µl溶胶液), 55℃保温6-10分钟,
其间轻摇Eppendorf管几次使胶*溶化。
注意:标准是1%的胶,如果是2%的胶则加入4倍体积溶胶液。
3. 加入10µl玻璃奶(玻璃奶使用前请充分混匀!), 涡旋振荡1-2秒, 冰浴
下放置10分钟;其间每隔2-3分钟混匀一次!12,000rpm离心30秒,
吸弃上清。
注意:充分振荡混匀,有助于玻璃奶分散开,增大吸附面积,提高得率,但对
大于15k以上的片段有少量的剪切。建议先按我们提供的振荡1-2s操作,如果
剪切程度过大,产物不适合您的后续实验,再做适当调整。
4. 加250µl漂洗液W2(请检查是否按瓶体标签提示加入无水乙醇),
用加样器吹打漂洗液, 轻柔地将玻璃奶悬浮混匀, 12,000rpm离心
30秒, 吸弃上清。
5. 重复步骤4(尽量吸尽漂洗液!)。吸取完漂洗液后再离心10秒钟,
用10ul Tip头将zui后一点儿漂洗液吸干净。然后, 放置于37℃温箱干
燥15-20分钟(如果未干, 可适当延长干燥时间! 特别提示:客户也
可选择50℃的烘箱来干燥玻璃奶,5-10分钟即可,这样可以节省实
验的时间,整个实验约半小时即能完成)。
6. 加适量洗脱缓冲液TE或无菌蒸馏水或TE(常规加入20µl), 混匀,
60℃水浴5分钟, 12,000rpm离心1分钟, 回收上清备用。重复步
骤6, 能提高回收率。
二.从溶液中纯化回收DNA片段
1. 在DNA溶液中加入2倍体积的溶胶液和10µl玻璃奶, 振荡混匀,
室温下放置5分钟。
2. 其余步骤同上。
附录: 【优化的PCR 产物克隆连接反应】
连接反应实验步骤:
1). 50µl PCR反应产物中加入1µl Klenow 酶(约2-5个单位),
于37℃放置半个小时。
2). 采用〖DNA快速纯化回收试剂盒(玻璃奶法)〗回收所需的DNA
片段。
3). 在10 µl反应体系中分别加入:载体pUC18/SmaI 1µl (0.1µg)、
所需插入的外源DNA片段6µl(与载体的摩尔数比约为3比1,或10
比1 ,甚至更高)、50% PEG8000 1µl、10X连接缓冲液 1µl、T4
DNA连接酶1µl(约1-5个单位)。
4). 于16℃放置过夜(>12小时), 随后即可做转化反应。
欢迎广大客户咨询,齐一生物: 程 . . .