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外周血细胞瑞氏(Wright)染色及计数实验

时间:2015-01-06      阅读:500

正血液常规检查是临床使用zui多的化验项目,其中白细胞分类计数又是血常规中必做化验之一。目前,我国各地医院化验室在做白细胞分类计数时,其血涂片多采用瑞氏(Wright’s)染色法。瑞氏染料中有美蓝和伊红两种成分,前者为碱性,后者为酸性,它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力,使其显现出不同的色调。

实验方法

  • 涂片法
实验方法原理瑞氏染料中有美蓝和伊红两种成分,前者为碱性,后者为酸性,它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力,使其显现出不同的色调。血细胞核由去氧核糖核酸和强碱性的组蛋白、精蛋白等形成核蛋白。这种强碱性的物质与瑞氏染料中的酸性染料伊红有亲和力,所以染成红色;核蛋白中还有少量的弱酸性蛋白,它们又与染液中的碱性染料美蓝起作用而染成蓝色,但含量太少,蓝色反应极弱 ,故核染色呈现紫红色。较幼稚的细胞之胞浆和细胞核之核仁中含有酸性物质,它们与染料中的碱性染料美蓝有亲和力,故染成蓝色。
实验材料

血液

试剂、试剂盒

瑞氏染料纯甲醇磷酸二氢钾*

仪器、耗材

显微镜玻片盖玻片滴管

抗体

Hamster IgG3, λ抗体
Hamster IgG3, λ抗体
Hamster IgG3, λ抗体

实验步骤

1.  制作血涂片

(1)滴一小滴血(约5 ul)于干净玻片上,推片与玻片应呈约30°角,用力均匀而较快,且不可复推。

(2)如血滴较小,推得较慢,角度小于30°,所制涂片较薄。

(3)如血滴较大,推得较快,角度比30°大时,则所制涂片较厚。


2.  将标本放平(置于一个固定架上),用滴管将染液滴于涂片上,可用滴管将染液驱散,使其布满整个涂片。

3.  染液布满整个涂片后,稍等片刻或立即加入缓冲液,并使缓冲液与染液混均匀。


4. 染液与缓冲液的比例

(1)染液量要充足,否则染液很快蒸发,将染料沉淀于细胞上。

(2)染液与缓冲液的比例为1:2~4左右比较合适。

(3)稀释度越大,染色时间越长,细胞着色较好,反之则越差。


5. 染色时间:视具体情况而定,一般约需10~30分钟。


6. 冲洗:用自来水冲洗涂片上之染料。


7. 显微镜检查:待自然干燥后用光学显微镜检查。

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