牛乙酰乙酸检测(ACAC)ELISA试剂盒（BD）

操作过程中可能出现的问题和解决方法：

为什么ELISA试剂盒出现白板，阳性对照不显色？

1、未加A、B显色液——不要漏加A液和B液

2、洗涤液配制有误——请按说明书所示稀释倍数配制

3、未加酶结合物而认为已加入——注意不要漏加

4、终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用——每次加液前均应看清标签

牛乙酰乙酸检测(ACAC)ELISA试剂盒（BD）为什么ELISA试剂盒显色淡，灵敏度偏低？

1、试剂盒在运输途中时间太长，温度太高——尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温

2、试剂盒未充分平衡——试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃）。

3、培养箱温度不足37℃——注意培养箱温度，放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定，非隔水式培养箱尤其应注意

4、保温时间不足——校正定时钟准确定时

5、洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加——按说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数

6、移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁——校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁要清洁，一次性使用

7、蒸馏水水质有问题——使用新鲜合格的蒸馏水

8、底物作用时间不足——准确定时

牛乙酰乙酸检测(ACAC)ELISA试剂盒（BD）为什么ELISA试剂盒重复性不佳?

1、样品数量多少不一，加样时间有长有短——重复某一样品时，加样时间尽可能与*次接近

2、保温时间不*，洗涤条件不*，操作人员不*——重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持*，以排除这些因素造成的不*的可能性

3、加样量不*——样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴

为什么ELISA试剂盒背景深，全部呈有色,临界对照OD值超出规定范围？

1、洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留——浓缩洗液准确配制；10倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释；充分洗涤，*拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染

2、样品污染——样品应新鲜采集，或低温保存，防止污染

3、培养箱温度超过37℃或反应时间过长——调整培养箱温度，准确定时

4、吸嘴重复使用，未洗净或消毒不*——吸嘴尽可能一次性使用

5、蒸馏水被污染——使用新鲜蒸馏水

6、酶等试剂混用——不同批号试剂勿混用

7、一次实验的标本量过多，加样时间太长，导致实际反应时间延长——合理安排实验，避免几块酶标板同时加样.

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