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大肠杆菌O157:H7显色培养基,用于食品、病人粪便样品中O157:H7菌的快速检测。O157:H7菌显亮红色、淡红色或红色,菌落周围没有蓝色晕圈,大肠杆菌和大肠菌群显暗蓝色、蓝色或紫色,菌落周围有蓝色晕圈;其它细菌显蓝色、黄色或无色。本培养基的特异性高,可以克服SMAC培养基引起的假阳性和假阴性结果,是一种很理想的快速检测培养基。
O157显色培养基成份 (g/L)
特殊营养物质 | 68.4 |
混合显色剂 | 2.6 |
琼脂 | 15.0 |
pH 7.0 ± 0.1 25 ℃ |
CT 添加剂 1ml/ 支 *5
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得*的结果。
注意
此培养基仅供实验室使用。
用法
称取本品 17.2g加入 200ml 蒸馏水,加热煮沸溶解并不停搅拌,加热2分钟左右。冷却至 45-50 ℃时,加入 CT 添加剂混匀,
倾入无菌平皿。
注意:制备好的培养基一定要保持表面干燥,可在 36±1℃的培养箱中倒置放置 1-2 小时。
O157显色培养基贮存
制备好的平板可保存 2-5 天,应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处, 保存温度 2-8 ℃,注意避光保存。
失效
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
操作步骤
1、按国家标准、 SN 标准、 FDA 标准或其它方法制备样品液;
2、取 25 克样品液加入 225ml mEC 肉汤或 mTSB 肉汤中, 36±1℃ 增菌培养 18-24 小时;
3 、用 3mm 接种环取 1 环增菌液,划线接种到 O157 菌显色培养基上,做 2 个平板;
4 、 36±1 ℃培养 18-24h , O157:H7 菌显亮红色,淡红色或红色 ,菌落周围没有蓝色晕圈 大肠杆菌和大肠菌群显暗蓝色、蓝色或紫色, 其它细菌显蓝色、黄色或无色;
5 、对典型菌落可做 O157:H7 菌血清学试验和全套生化试验。
注:必须在 36±1℃ 培养 24 小时内判读结果,以免菌落颜色发生变化。
质量控制
1 、外观
此干燥培养基的粉末均匀,具有良好的流动性,呈淡蓝色。制备好的平板呈蓝色色固体培养基。
2 、微生物试验
在 36 ± 1 ℃培养 18-24h 小时:
质控菌株 | ATCC | 生长情况 | 菌落颜色 |
大肠杆菌 O157 | 35150 | +++ | 亮红色 |
* | 25923 | -/+ | 黄色 或无色 |
大肠杆菌 | 25922 | +++ | 暗蓝色,菌落周围有晕圈 |
沙门氏菌 | 14028 | +++ | 蓝色 |
奇异变形杆菌 | 12453 | +/- | 无色 |
方法的局限性
本培养基对典型大肠杆 O157:H7 必须做血清学试验或生化试验。
典型特征
典型大肠杆菌O157:H7菌显亮红色、淡红色或红色,菌落周围没有蓝色晕圈;大肠杆菌和大肠菌群显蓝色或紫色,菌落周围有蓝色晕圈;其它细菌显蓝色、黄色或无色;