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猪氧化低密度脂蛋白(OxLDL)elisa试剂盒实验原理:
用纯化的MT抗体包被微孔板,制成固相载体,往微孔中依次加入标本或标准品、*化的MT抗体、HRP标记的亲和素,经过*洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的MT呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
产品规格:48T
产品英文:PoFAine oxidized lowdensity lipoprotein,OxLDL elisa Kit
产品用途:仅供科研使用
检测范围:15.6 pg/ml - 1,000 pg/ml
特 异 性:本试剂盒可同时检测重组或天然的,且与其它相关蛋白无交叉反应
猪氧化低密度脂蛋白(OxLDL)elisa试剂盒显色的重要性
显色是ELISA中的zui后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中,加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性测定的显色可在室温进行,时间一般不需要严格控制,有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色情况适当缩短或延长反应时间,及时判断。
OPD底物显色一般在室外温或37℃反应20-30分钟后即不再加深,再延长反应时间,可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色,显色反应应避光进行,显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD产物用酸终止后,显色由橙黄色转向棕黄色。
TMB受光照的影响不大,可在室温中置于操作台上,边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性,宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后,约40分钟显色达,随即逐渐减弱,至2小时后即可*消退至无色。TMB的终止液有多种,叠氮钠和SDS等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24小时)不褪,是目视判断的良好终止剂。此外,各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色,此时可用特定的波长(450nm)测读吸光值。