高效液相色谱法测定*及其代谢产物*
时间:2020-04-21 阅读:606
细胞色素P450I A2(CYPI A2)是主要存在于肝脏起氧化代谢作用的药物代谢酶,*是研究P450I A2活性的特异性底物。口服或静脉注射*后,经P450I A2酶催化,氮位去乙基,形成*。通过测定两者浓度,可以反应P450I A2在体内的活性。文献报道只测定*单一组分。本实验建立了高效液相色谱法同时测定*及其代谢物*的浓度,方法简便、快速、结果准确、可靠,适合药物的体内代谢研究。
仪器准备
仪器简介
LC-600A智能全控液相色谱系统由P600高压恒流泵与UV600紫外检测器直接构成等度分析系统。使用WS600工作站可以同时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等,实行多元高压洗脱、波长扫描等功能。
应用领域
化合物检测、法医毒物分析、蛋白质组学食品检测、药物分析、环境分析、聚合物分析
样品处理:
精取血样0.2mL,加50μL内标,加入100μL2.5%硫酸锌溶液,振荡30s,16000r/min离心10/min,取上清液20μL进样测定。
色谱条件:
色谱柱 | Nova-Pak R C18(3.9mm×150mm,5μm) |
流动相 | 甲醇水溶液 |
梯度洗脱程序 | 17%(体积分数,下同)甲醇(保持5min)→80%甲醇(10min)→17%甲醇(12min) |
流速 | 1.0mL/min |
检测波长 | 254nm |
进样量 | 20ml |
谱图分析: