脂氧合酶活性测定试剂盒说明书
时间：2021-06-02 阅读：678
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上海信帆生物科技有限公司 -
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脂氧合酶（Lipoxygenase, LOX）活性测定试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
LOX 广泛存在于动植物组织中，催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。在生物体
的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。
测定原理：
LOX 催化亚油酸氧化，氧化产物在 280nm 处有特征吸收峰；测定 280nm 吸光度增加速率，
来计算 LOX 活性。
自备仪器和用品：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL
试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
测定：
1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 280nm，蒸馏水调零。
2. 在试剂三中加入 25mL 试剂二（振荡混匀 1min），在 30℃水浴中预热 10 min 以上。用不
完的试剂 4℃保存。
3. 对照管：依次在 1mL
石英比色皿中加入
100μL
样本和
900μL
试剂二，30℃反应
30min
后，记录 A 对照。
4. 测定管：依次在 1mL
石英比色皿中加入
100μL
样本和
900μL
试剂三，30℃反应
30min
后，记录 A 测定。
5. ΔA=A 测定-A 对照
LOX 活性计算公式：
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化 0.01 个单位为 1 个酶活单位。
LOX (U/mg prot) =ΔA×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T×100
= 33.33×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克组织每分钟催化吸光值变化 0.01 个单位为 1 个酶活单位。
LOX (U/g 鲜重) =ΔA×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T×100
= 33.33×ΔA÷W
Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，需另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；
V 样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1mL；V 反总：反应总体积，1mL；V 样总：
上清液总体积，1mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min。