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| 豚鼠白介素4(IL-4)ELISA试剂盒 | |||||
| 产品中文： | 豚鼠白介素4(IL-4)ELISA试剂盒 | ||||
| 产品英文： | Guinea pig interleukin 4,IL-4 ELISA Kit | ||||
| 规格： | 48T/96T | ||||
| 保质期： | 6个月 | ||||
| 保存条件： | 2到8度 | ||||
| 试剂盒组成: | |||||
| 1 | 30 倍浓缩洗涤液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1 瓶 |
| 2 | 酶标试剂 | 6ml×1 瓶 | 8 | 标准品 | 0.5ml×1 瓶 |
| 3 | 酶标包被板 | 12 孔×8 条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1 瓶 |
| 4 | 样品稀释液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 说明书 | 1 份 |
| 5 | 显色剂 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 张 |
| 6 | 显色剂 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 个 |
| 豚鼠IL-4试剂盒(H13白介素4)ELISA试剂盒提供专业售后 | |||||
| 样本处理及要求： | |||||
| 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 | |||||
| 2. 血浆：应根据试剂盒的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入 10 ％（ v/v ）抗凝剂 ( 0.1M 柠檬酸钠或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右 （ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。如有沉淀形 成，应再次离心。 | |||||
| 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 | |||||
| 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 | |||||
| 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 | |||||
| 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. | |||||
| 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 | |||||
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| 操作步骤 | |||||
| 1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为30ng/L，20ng/L ，10ng/L，5ng/L， 2.5ng/L）。 | |||||
| 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 | |||||
| 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 | |||||
| 4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 | |||||
| 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 | |||||
| 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 | |||||
| 7. 温育：操作同3。 | |||||
| 8. 洗涤：操作同5。 | |||||
| 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. | |||||
| 10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 | |||||
| 11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 | |||||
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