伴刀豆球蛋白A琼脂糖凝胶FF亲和填料

ConA NUPharose FF 

产品介绍

ConANUPharose FF 是将刀豆蛋白A(ConcanavalinA，简称 ConA)键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质，主要用于各种带甘-露醇及葡萄糖残基的糖蛋白(包括糖蛋白病毒)、多糖和糖脂的分离和纯化。ConA 是从刀豆中提取出来的一种四聚体金属蛋白，是凝集素的一种，在 Mn?和 Ca?存在的情况下，可结合 α-D-吡喃甘露糖基、a-D-吡喃葡萄糖基和具有 C-3、C-4 或 C-6 羟基空间相关残基的分子。

ConA NUPharose FF 的应用领域还包括酶-抗体偶联物的纯化、IgM 的纯化、洗涤剂溶解的膜中细胞表面糖蛋白的分离纯化、膜囊泡的分离以及含碳水化合物物质组成变化的研究等。

1色谱柱装填

(1)所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体做脱气处理。

(2)填料用量计算:通过沉降定量填料体积，需要的沉降填料体积=柱体积X压缩

比(也称压缩因子)。沉降体积是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降读取的稳定

体积。ConANUPharose FF的压缩比为1.15。为使达到装柱比，可通过柱头下压的方法，

也可以通过高流速压柱。

以下阐述与层析系统连接时，填料的色谱柱装填方法。

(3)填料清洗:将填料悬液充分摇匀后量取相应体积，抽滤除去液体，并用约3倍

填料体积的纯化水洗涤，重复3次，以除去保存液。

(4)装柱填料悬液准备:将填料转移到适当的容器中，加入适量的装柱液，制成

50~75 v%的装柱填料悬液，使用前搅匀。

(5)装填前准备:在清洗干净的层析柱下端加入装柱液，以除去下垫片及层析柱下

端的空气，在柱内保留少量的蒸馏水，拧紧下堵头，调整柱子使其垂直于地面。

(6)装填:将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内(必要时使用装柱器)，

为避免引入气泡，应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后，用装柱液将装柱

器加满，拧紧装柱器上盖，将柱子与层析系统连接。

(7)压柱:使柱内填料自然沉降(或 10~20cm/h的低流速下沉降)，待填料沉降完

全后(填料与液体的界面清晰)，去除装柱器，装上上柱头，并将柱头下降至界面处;通

过高流速(推荐流速见下表，注意柱压不超过0.3MPa)，继续压柱至界面清晰稳定，标

记界面稳定时的柱高。停泵，打开柱头上的阀门/堵头，关闭柱底的阀门/堵头，下压柱头

至标记位置下方与压缩比对应的位置，旋紧柱头，装柱完成。装柱完成后，需用高流速

平衡柱内的填料。

伴刀豆球蛋白A琼脂糖凝胶FF亲和填料