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| 大鼠肾上腺素(EPI)ELISA试剂盒 | |||||||
| 上海信帆生物是一家专业的elisa试剂盒供应商,销售各种进口和国产品牌的elisa试剂盒。对于elisa试剂盒,我们提供完善的质量保证,专业的技术解答,耐心周到的售后服务,成为国内多家科研机构和高校的试剂盒供应商。 | |||||||
| 本试剂盒含量是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系 | |||||||
| 大鼠肾上腺素(EPI)ELISA试剂盒 | |||||||
| 试剂样本收集和处理方法 | |||||||
| 在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。 | |||||||
| 液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。 | |||||||
| 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 | |||||||
| 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 | |||||||
| 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参? 照此实行。 | |||||||
| 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。 | |||||||
| 5.培养细胞：检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 | |||||||
| 6.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂，用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 | |||||||
| 7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. | |||||||
| 8.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 | |||||||
| 大鼠肾上腺素(EPI)ELISA试剂盒 | |||||||
| 详细操作步骤 | |||||||
| 1. 加样：标准品设定5个浓度点10个孔，每个浓度设定平行孔，加入50微升不同浓度的标准品，空白孔设定1个孔加入50微升蒸馏水（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔，在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 | |||||||
| 2. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 | |||||||
| 3. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。 | |||||||
| 4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 | |||||||
| 5. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 | |||||||
| 6. 温育：操作同3。 | |||||||
| 7. 洗涤：操作同5。 | |||||||
| 8. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. | |||||||
| 9. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 | |||||||
| 10. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 | |||||||
| 试剂盒操作过程中有什么注意事项 | |||||||
| 1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 | |||||||
| 2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 | |||||||
| 3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。 | |||||||
| 4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。 | |||||||
| 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 | |||||||
| 6． 底物请避光保存。 | |||||||
| 7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. | |||||||
| 8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 | |||||||
| 9． 本试剂不同批号组分不得混用。 | |||||||
| 11. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 | |||||||
| 计算方法 | |||||||
| 操作完成之后，详细的计算方式是：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 | |||||||
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