Il-8是一种分子量为8～10kD的多肽，对嗜中性粒细胞，T淋巴细胞、嗜硷性粒细胞具有趋化作用，并可激活嗜中性粒细胞，是一种重要的炎症介质。在严重感染病人的血清中、炎症局部渗出液中都可检测到高水平的IL-8。此外，近年来的研究表明，IL-8可能与各种组织缺血后再灌注损伤的发生有关。上海研晶生物技术有限公司的研究人员采用两株自制的单克隆抗体建立了夹心法ELISA用于检测IL-8，敏感性可达156Pg/ml。

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Il-8是一种分子量为8～10kD的多肽，对嗜中性粒细胞，T淋巴细胞、嗜硷性粒细胞具有趋化作用，并可激活嗜中性粒细胞，是一种重要的炎症介质。在严重感染病人的血清中、炎症局部渗出液中都可检测到高水平的IL-8。此外，近年来的研究表明，IL-8可能与各种组织缺血后再灌注损伤的发生有关。我们采用两株自制的单克隆抗体建立了夹心法ELISA用于检测IL-8，敏感性可达156Pg/ml，操作简单，重复性良好，可用于IL-8的基础和临床研究。
一、原理：采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体，其中一株(4D7)作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的IL-8,另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。
二、试剂器材
1. 试剂盒提供包被抗体、酶标抗体、标准品，底物(ABTS)、96孔elisa板。
2. 包被缓冲液、PBS、底物缓冲液配制同常规ELISA法。
三、操作步骤：
1. 包被：pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板,100μl/孔，放4℃,36小时。
2. 封闭：0.1%吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次，加3%BSA Buffer A(Buffer B)200μl/孔，放37℃,1小时。
3. 加待检样品：Buffer A 冲洗96孔板三次，加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100μl/孔，放37℃,3小时。
4. 加酶标抗体：Buffer A冲洗96孔板五次,3%PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800，加入96孔板，100μl/孔，放37℃,1小时。
5. 显色：Buffer A冲洗96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS),0.2mg/ml,加3%H2O2,2μl/ml，加入96孔板，100μ/孔，室温下或37℃显色。
四、注意事项：
1. 待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。
2. 封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。