人中性粒细胞防御素1-3(HNP1-3）Elisa检测试剂盒大鼠体内药物动力学研究
    摘　要:目的研究人中性粒细胞防御素1-3(HNP1-3）Elisa检测试剂盒在大鼠体内的经时过程并计算药物动力学参数。方法采用HPLC法测定大鼠静脉注射给药后血浆中人参皂苷Re的血药质量浓度，用3P87药动学程序求算其药物动力学参数。结果静脉注射3种不同剂量（20、30、40mg·kg^-）的人参皂苷Re后，3组大鼠的药物动力学特点成双隔室模型。t1／2（α）分别为6．505、6．817、4．499min，t1／2（α）分别为28．96、30．49、27．57min，AUC分别为599．31、1025．65、1415．7min·mg·L^-1。结论主要动力学参数十分相近，且AUC随剂量增加而成比例增加，说明在此剂量范围内Re的消除为线性动力学。[著者文摘]
 关键词:人参皂苷Re 药物动力学 高效液相色谱法

 Pharmacokinetics of ginsenoside Re in rat

 Abstract:Objective To develop a HPLC method for the determination of ginsenoside Re concentrations in rat plasma samples and to research pharmacokinetics of the concentration-time parameter of ginsenoside Re in rats after iv. Methods The pharmacokinetic characteristics were calculated after iv of 20, 30 and 40 mg·kg^- 1 ginsenoside Re in rats. Results The main parameters t 1/2（α） were 6. 505, 6. 817 and 4. 499 min respectively, t 1/2（α） were 28.96, 30.49 and 27.57 min respectively, The AUC were 599.31, 1025.65, 1415.7 mg·L^-1, min respectively, the main parameters are similar. Conclusions The result that the AUC values are directly relative to the doses indicates that the elimination of ginsenoside Re is linear pharmacokinetics.[著者文摘]

 Key words:ginsenoside Re; HPLC; pharmacokinetics

人中性粒细胞防御素1-3(HNP1-3）Elisa检测试剂盒(gensingnoside Re，结构式见图1) 是人参皂苷的一类主要有效成分，质量分数约占总 皂苷的30％。人参皂苷Re具有较强的抗缺血性 心律失常作用n ；起到自由基陷阱作用，可以保护 所有的未饱和脂肪酸，阻止其被氧化，有显著的抗 衰老功能 ；XCd’鼠的体液免疫和细胞免疫均有刺 激作用，增强免疫功能。此外人参皂苷Re还具有 较强的镇静作用及抗利尿作用，对东莨菪碱造成的 小鼠功能性损伤具有很好的修复作用L3 J。另据文 献[4]报道，人参皂苷Re还是人参皂苷中降低醋酸 *不良反应的主要成分，同时具有刺激蛋白酶 的分泌【5J，增强药物的透皮吸收的功能 6。

 目前国内外对人参皂苷的研究侧重于植物化 学和药理学。近二十年来，虽对人参皂苷Rgl和 Rbl的药动学研究可见报道【7-9 J，但对人参皂苷 Re的药物动力学研究尚未见文献报道。

 1 仪器与材料

 Perkin Elmer型高效液相色谱仪(1022泵，Spectra Focus检测器，美国PE公司)，YKH型液 体快速混合器(江西科研厂)，SLJ—II型电动 离心机(沈阳市理化仪器厂)，SCQ一50型超声波 清洗机(上海申波超声公司)，电热恒温水浴锅(江 苏省东台市电器厂)。

 人参皂苷Re、*(HPLC面积归一化法测 定纯度质量分数分别为99．5％、99．1％，自制，沈 阳药科大学天然药化教研室提供)，无水乙醇(分 析纯，山东禹王化学试剂厂)，磷酸、正丁醇(分析 纯，天津化学试剂厂)，甲醇、乙腈(色谱纯，山东禹 王化学试剂厂)，水为重蒸馏水。

 Wistar大鼠，体质量200～260 g，雌雄兼用， 沈阳药科大学实验动物中心提供，合格证号： SCXK(辽)2003-008。

 2 方法与结果

 2．1 色谱条件选择

 色谱柱：HYPERSIL ODS(10肛m，200 mm× 4．6 mm，)，流动相：乙腈一甲醇一水一磷酸 (体积比为18．40：27．50：54．10：0．05)，流速： 0．8 mL·min～，检测波长：207 nm，柱温：20℃ ， 进样量：20 L。

 2．2 标准溶液及内标溶液的配制

 精密称取人参皂苷Re适量，用无水甲醇溶 解配制成1 mg·I -1的标准储备液，稀释标准储备 液得100 mg·L 标准工作液。内标物*用无水甲醇溶解配成100 mg·L-1内标储备液，稀释 内标储备液得20 mg·L-1的内标工作液，置冰箱 中冷冻保存。

 2．3 给药方法

 对大鼠实施颈静脉持久性插管术[ 】，术后大 鼠单笼饲养，72 h后供实验使用，在每次取血的 间隔内将导管内充满100 mg·L-1肝素生理盐水 以防血凝。大鼠实验前禁食12 h交叉静注20、 30、40 mg·kg-1不同剂量的人参皂苷Re注射液， 交叉实验的实验间隔为72 h。于给药前和给药后 5、10、20、30、45、60、90、120 min各取血250 L置 于涂有肝素的塑料离心管中，离心(3 000 r·min-1) 5 rain，取血浆100肚L，置于冰柜(一18℃)中保存待测。

 2．4 血浆样品的处理

 精密吸取血浆样品100 L置5．0 mL具塞 离心试管中，加入2 mI 正丁醇和20 L内标工 作液，置液体快速混合器上振荡5 min。离心 (5 000 r·min-1)10 min，移取上清液，氮气吹干， 用流动相溶解。离心(10 000 r·min-1)10 min，取 上清液进样20肚L。

 2．5 专属性考察

 按“2．4”条方法操作。实验条件下，血浆中杂 质不干扰样品及内标物的测定，人参皂苷Re及 内标物*的保留时间分别为15 min和 17 min，色谱图见图2。

 A- Blank plasma；B- Blank plasma with gensingnoside Re；C- Blank plasma with puerarin；D---Plasma sample with puer— arin：1- gensingnoside Re；2一Puerarin

 Fig．2 HPLC chromatograms of gensingnoside Re and internal standard(puerarin)in rat plasma

 2．6 标准曲线的制备

 分别于一系列试管中加入人参皂苷Re及空白大鼠血浆100肚L，使各管浓度分别为1、5、15、30、45、75、100 mg·L～，按“2．4”条操作，重复操作5次，以人参皂苷Re与内标物峰面积的比值(Ai／As)为纵坐标，人参皂苷Re的质量浓度为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程及相关系数。本方法在1～100 mg·L-1内线性关系良好，回归方程为R=0．039 9p一0．024 4，r=0．999 2。其中R为人参皂苷Re与内标物lD峰面积的比值，l为人参皂苷Re的质量浓度。

 2．7 精密度与准确度

 取空白大鼠血浆100 L，按“2．6”条方法配制低、中、高3个质量浓度(分别为5、30、100 mg·L-1)的人参皂苷Re样品，进行6个样品分析，连续测定3 d，用当日标准曲线计算人参皂苷Re样品的质量浓度，从而考察方法的精密度与准确度，结果见表1。

 Table I Accuracy and precision of the HPLC assay gensingnoside Re in the rat plasma(Jl 6)

 2．8 血药质量浓度测定

 样品测定时随行标准曲线，把待测物与内标 物的峰面积之比代入当天的标准曲线，计算出未 知样品的质量浓度，以人参皂苷Re样品是否合 格决定该样品测定结果的取舍。

 2．9 大鼠静脉注射不同剂量(20、30、40 mg·kg-1 的人参皂苷Re的药物动力学参数和平均血药质 量浓度一时间曲线

 大鼠静注3种不同剂量的人参皂苷Re注射 液，平均血药质量浓度一时间曲线见图3。

 将低、中、高3个剂量组的血药质量浓度一时 间数据用3P87药物动力学程序处理后，得三者 的药物动力学参数，结果见表2。结果表明，大鼠 静注低、中、高3个剂量组的人参皂苷Re后，3组 的药物动力学特点成双隔室模型。3种不同剂量 的tl／2(口)、V(c)、C1等主要动力学参数十分相近， 经统计学t检验无显著性差异(P>0．05)，且AUC随剂量增加而成比例增加，说明在此剂量范 围内人参皂苷Re的消除为线性动力学。

 3 讨论

 大鼠经静脉注射给药人参皂苷Re 40 mg·kg-1后，药时曲线符合二室开放模型 tl／2( )为4．499 min，提示人参皂苷Re自*室向周边室分布迅速，tI12(f1)为27．57 min，提示人 参皂苷Re在体内消除迅速，表观分布容积Vc为 0．33 L·kg～，约为大鼠平均血容量l5倍，提示该 药分布广泛。

 单纯以甲醇、水为流动相时人中性粒细胞防御素1-3(HNP1-3）Elisa检测试剂盒峰形不好，拖尾，且分离不*。加入乙腈及磷 酸调节峰形，zui后确定配比为乙腈一甲醇一 水一磷酸(体积比为18．40：27．50：54．10：0．05)， 与血样中内源性物质分离良好。

 由于人参皂苷Re检测波长为207 nm，干扰 因素较多，又因其在正丁醇中的溶解度zui大，考查 了分别用1．0、1．5、2．0、2．5 mL正丁醇萃取和分 别用1．0、2．0 mL甲醇沉淀的方法提取血浆中的 样品，在50～60℃水浴中用氮气吹干，用流动相 溶解。离心(10 000 r·rainI1)10 rain，取上清液进 样20肛L。比较HPI C图谱，以分离效果、杂质含 量及提取率为综合指标，确定采用2．0 mL正丁 醇萃取的方法进行血浆样品处理，效果较好。

人超敏生长激素(US-GH）Elisa检测试剂盒 Human Ultra Sensitive growth hormone,U S-GH ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人超敏前列腺特异性抗原(PSA-US）Elisa检测试剂盒 Human Ultra Sensitive Prostate Specific Antigen,PSA U S ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人*/苯丙酸去*(NP）Elisa检测试剂盒 Human Nandrolone Phenylpropionate,NP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人16α羟基雌酮1(16-αOHE-1）Elisa检测试剂盒 Human 16-αHydroxyestrogen 1,16-α OHE-1 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人*(HYD）Elisa检测试剂盒 Human Hydrocortisone,HYD ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人糖皮质激素受体β(GR-β）Elisa检测试剂盒 Human glucocorticoid receptor-β,GR-β ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人糖皮质激素受体α(GR-α）Elisa检测试剂盒 Human glucocorticoid receptor-α,GR-α ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人高敏三碘甲状腺原氨酸(u-T3）Elisa检测试剂盒 Human Ultrasensitivity Tri-iodothyronine,u-T3 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人黄体生成素释放激素(LHRH）Elisa检测试剂盒 Human Luteinizing Hormone-Releasing Hormone,LHRH ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人8异前列腺素(8-iso-PG）Elisa检测试剂盒 Human 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人肾素(Renin）Elisa检测试剂盒 Human Renin ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人肾上腺素(EPI）Elisa检测试剂盒 Human Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌二醇受体(ER）Elisa检测试剂盒 Human Estradiol receptor,ER ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP）Elisa检测试剂盒 Human Parathyroid Hormone Related Protein,PTHrP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人血管紧张素原(aGT）Elisa检测试剂盒 Human angiotensinogen,aGT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ）Elisa检测试剂盒 Human angiotension Ⅰ,Ang-Ⅰ ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人卵泡抑素(FS）Elisa检测试剂盒 Human Follistatin,FS ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人甲状腺素抗体(TAb）Elisa检测试剂盒 Human Parathyroid Hormone Related Protein,PTHrP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人儿茶酚胺(CA）Elisa检测试剂盒 Human catecholamine,CA ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人半*蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C）Elisa检测试剂盒 Human Cystatin C,Cys-C ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人乙酰*受体抗体(AChRab）Elisa检测试剂盒 Human acetylcholine receptor antibody,AChRab ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人5羟色胺(5-HT）Elisa检测试剂盒 Human 5-Hydroxytryptamine,5HT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人抑制素A(INH-A）Elisa检测试剂盒 Human Inhibin,INH-A ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人性激素结合球蛋白(SHBG）Elisa检测试剂盒 Human sex hormone-binding globulin,SHBG ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人脱氢表雄酮S7(DHEA-S7）Elisa检测试剂盒 Human Dehydroepiandrosterone S7,DHEA-S7 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人脱氢表雄酮(DHEA）Elisa检测试剂盒 Human Dehydroepiandrosterone,DHEA ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人降钙素基因相关肽(CGRP）Elisa检测试剂盒 Human calcitonin gene related peptide,CGRP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人*(SS）Elisa检测试剂盒 Human Somatostatin,SS ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人生长激素释放多肽(GHRP）Elisa检测试剂盒试剂盒 Human Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人抑制素B(INH-B）Elisa检测试剂盒 Human inhibin B,INH-B ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人促甲状腺素释放激素(TRH）Elisa检测试剂盒 Human growth hormone releasing hormone,GHRH ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌激素(E）Elisa检测试剂盒 Human estrogen,E ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人褪黑素(MT）Elisa检测试剂盒 Human Melatonin,MT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人6酮前列腺素(6-K-PG）Elisa检测试剂盒 Human 6-keto-prostaglandin,6-K-PG ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人血栓素B2(TXB2）Elisa检测试剂盒 Human Thromboxane B2,TX-B2 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人皮质酮/肾上腺酮(CORT）Elisa检测试剂盒 Human Corticosterone,CORT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人前列腺素E2(PGE2）Elisa检测试剂盒 Human Prostaglandin E2,PG-E2 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人双氢睾酮(DHT）Elisa检测试剂盒 Human Dihydrotestosterone,DHT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人促生长激素释放激素(GHRH）Elisa检测试剂盒 Human growth hormone releasing hormone,GHRH ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌激素(E）Elisa检测试剂盒 Human estrogen,E ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人孕激素/孕酮(PROG）Elisa检测试剂盒 Human Progesterone,PROG ELISA kit ELISA.  96T/48T
人超敏游离雌三醇(uE3）Elisa检测试剂盒 Human ultra Estriol,uE3 ELISA KIT  ELISA.  96T/48T
人*(NA）Elisa检测试剂盒试剂盒 human Noradrenaline,NA ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人前列腺素F(PGF）Elisa检测试剂盒 human Prostaglandin F,PG-F ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人前列腺素E1(PGE1）Elisa检测试剂盒 human Prostaglandin E1,PG-E1 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人内皮素1(ET-1）Elisa检测试剂盒 human Endothelin 1,ET-1 ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人促卵泡素(FSH）Elisa检测试剂盒 Human follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人游离β绒毛膜*(f-βhCG）Elisa检测试剂盒 human free chorionic gonadotropin,f-βhCG ELISA KIT ELISA.  96T/48T
人大内皮素(BigET）Elisa检测试剂盒 Human Big Endothelin,Big ET ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人全段甲状旁腺素(i-PTH）Elisa检测试剂盒 Human intact Parathormone ,i-PTH ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人降钙素(CT）Elisa检测试剂盒 Human Calcitonin,CT ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人促甲状腺素(TSH）Elisa检测试剂盒 Human Thyroid Stimulating Hormone,TSH ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人*(Cortisol）Elisa检测试剂盒 Human Cortisol ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌二醇(E2）Elisa检测试剂盒 Human Estradiol,E2 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人脱氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S）Elisa检测试剂盒 Human Dehydroepiandrosterone sulfate,DHEA-S ELISA Kit  ELISA.  96T/48T
人睾酮(T）Elisa检测试剂盒 Human Testoterone,T ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人游离睾酮(F-TESTO）Elisa检测试剂盒 Human Free Testoterone,F-TESTO ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雄烯二酮(ASD）Elisa检测试剂盒 Human Androstenedione,ASD ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人雌三醇(E3）Elisa检测试剂盒 Human Estriol,E3 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人17羟孕酮(17-OHP）Elisa检测试剂盒 Human 17-Hydroxyprogesterone,17-OHP ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人三碘甲状腺原氨酸(T3）Elisa检测试剂盒 Human Tri-iodothyronine,T3 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人甲状腺素(T4）Elisa检测试剂盒 Human thyroxine,T4 ELISA Kit ELISA.  96T/48T
人甲状腺素(T4）Elisa检测试剂盒 Human thyroxine,T4 ELISA Kit ELISA.  96T/48T