ELISA试剂盒试验操作过程解析

ELISA检查以灵敏度较高、特异性较好等特点在食品安全检查中得到广泛的运用，但在操作中的各个环节对试验的检查作用影响较大。如不留意，有也许致使显色不*、花板、检查无效等成果。所以试验进程中应留意选择质量的检查试剂，严厉依照试剂阐明书进行操作。在ELISA操作进程中，一起做好室内质控、室间质评，仔细做好各项查验记载，才干确保ELISA检查质量。
一、样品的保留
用于ELSIA检查的样本十分广泛，包含各种动物安排、动物体液以及其他食品获取物等。有些样本能够直接经过简略离心、稀释，有些则需求经过理化办法进行获取。检查样品应确保新鲜，经前处理的获取液应及时进行检查，时刻越长，获取液中的抗原的效价越低。如不及时检查，应及时放4℃冰箱保留。防止细菌污染，因菌体中也许富含内源性HRP，也许会致使假阳性反响。如在冰箱中保留过久，其间的HRP也许发生聚合，在间接法ELSIA检查中可使本底加深。所以标本如需保留做屡次检查，宜选用少数分装冰箱保留。安排样本若不及时做处理，应当放置-15℃冰箱保留。

二、试剂的预备
严厉依照试剂盒的阐明书的请求预备好需求用到的试剂。LEISA检查中应选用蒸馏水或许去离子水，洗刷用水应新鲜和高质量，留意检查是不是需求和洗刷液进行稀释。自配的缓冲液运用PH计测量校对。从冰箱取出的试剂有必要与室温平衡方可运用。试剂盒中本次试验不需求的试剂有些及时放回冰箱保留。

三、加样
在ELSIA加样进程中，应加所加物加到ELISA板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留意不行溅起，不行发生气泡。加标本通常运用微量加样器，按规则的量参加孔板中。每次加标本有必要更换枪头，防止穿插污染。加酶符号物和底物液时可用定量多道加样器，使加样进程敏捷完成。
四、温育
温育的方法通常选用水浴，可将酶标板置于水浴箱中，酶标板底贴着水面，是温度敏捷平衡。为防止蒸腾，酶标板上应加盖，也可用塑料贴封或许保鲜膜覆盖板孔，此刻可让反响板漂浮在水面上。若保温箱，酶标板应放在湿盒内，湿盒要选用传热功能杰出的资料或许如金属等，在盒底垫湿的纱布，将酶标板放在纱布上。这样能确保安稳敏捷平衡。不管水浴还是湿盒温育，反响板均不宜叠放，以确保各板的温度能敏捷平衡。室温温育的反响，操作时的室温要严厉约束在室温的范围内，规范室温温度是指20℃-25℃，详细的操作时刻依据阐明书的请求严厉控制温育。
五、洗刷
洗刷在ELISA进程中虽然不是一个反响进程，可是却决议着试验的胜败，ELSIA反响即是靠洗刷来到达将游离和的酶符号物别离的意图。经过洗刷来清洗掉残留在酶标板是未能与固相抗原或抗体的物质，已经在反响进程中十分特异性地吸附于固相载体上的搅扰物质。聚苯乙烯等塑料资料对蛋白质的吸附石普遍性的，而在洗刷时又应把这种非特异性吸附的搅扰物质洗刷下来。能够说在ELSIA操作进程中，洗刷是首要的关键技术，每一次清洗都有必要谨慎进行，操作者应严厉依照请求进行洗刷。清洗的方法有手艺清洗和洗板机主动清洗两种。下面首要介绍手艺清洗方法。
1、吸干或许甩干孔内反响液
2、用洗刷液洗一遍。（将洗刷液注满板孔后，即甩去）
3、浸泡，将洗刷液注满酶标孔，放置1-2min，间歇摇摆，浸泡时刻不行随意缩短。
4、甩掉孔内液体，用清洗毛巾或许吸水纸拍干。
5、重复3和4进程，洗刷4次。
六、显色和比色
显色是ELSIA中的zui后一个温育进程，此刻酶催化无色底物出产有色商品。反响的温度和时刻仍是影响显色的zui主要的要素。参加底物后的反响时刻和温度应当按规则严厉控制。
七、酶标仪读板
测读吸光度值时，要选用商品的灵敏吸收峰。有的酶标仪可用双波长读数，即每孔先后读两次，在波长，第二次在不灵敏的波长，两次测读不移动酶标板的方位。终究读数得到值为两者之差，即灵敏波长值减去不灵敏波长值。双波长读数能够减少由容器壁划痕或指纹形成的光搅扰。
八、成果判定
依据试验读数，成果商品阐明进行成果判定。