中文名称：I型原胶原N端前肽检测试剂盒

英文名称：PINPELISA KIT

规格：96T/48T

保存条件：2-8℃

I型原胶原N端前肽检测试剂盒用 途：用于定量检测血清、血浆及相关液体样本中I型原胶原N端前肽 的含量。

I型原胶原N端前肽检测试剂盒间接ELISA方法用以检测血清中抗体，包被抗原为自己原核表达纯化蛋白，已通过琼脂扩散试验检验（纯化抗原与阳性血清有沉淀线，而阴性血清无）。用该抗原做方阵试验，抗原梯度为0.3，0.6，0.9，1.2，1.5，1.8，2.1微克，血清分别稀释1:5,1:10,1:50,1:100,1:200,1:300。步骤如下：

① 取空白酶标板，于每孔中加入纯化蛋白溶液100μL ，于振荡器上震荡混匀，用封口膜封盖酶标板，室温包被一夜。

② 取下封口膜，弃去酶标板内溶液，用洗剂液（1×PBST）洗剂酶标板5次，zui后一次吸干。每孔加入1%BSA封闭液100μL， 37℃封闭1h。

③I型原胶原N端前肽检测试剂盒取下封口膜，弃去酶标板内溶液，用洗剂液（1×PBST）洗剂酶标板5次，zui后一次吸干。每孔加入一抗血清100μL，37℃封闭1h。

④取下封口膜，弃去酶标板内溶液，用洗剂液（1×PBST）洗剂酶标板5次，zui后一次吸干。每孔加入酶标二抗兔抗羊IgG-HRP 100μL，37℃封闭1h。

⑤取下封口膜，弃去酶标板内溶液，用洗剂液（1×PBST）洗剂酶标板5次，zui后一次吸干。每孔加底物A 50μL和底物B 50μL，震荡混匀，室温显色10～15min。

⑥每孔加入终止液50μL，立刻在酶标仪450nm波长下读取OD值。线性范围的影响有两个因素：1、本身抗体的亲和力，亲和力越高灵敏度越高，高点与低点比值也就越高，若标准曲线的斜率接近于1，抗体亲和力还是可以的。比值没有相关规定说一定要高于64。

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