乙䞠*䞟酶˄acetylcholinesteraseˈAchE˅活性测定试剂盒说明书 
                                                                                         分光光度法    50 管/48 样 
注意˖正式测定之前选择 2-3 个预期ᐞ异大的样本做预测定DŽ 
测定意义˖ 
AchE 属于*水解酶ˈ广泛存在于各种动物组㓷和血清中DŽAchE催化乙䞠*˄Ach˅
水解ˈ在神㓿传导调节中起重要作用DŽ 
测定原理˖ 
AchE 催化Ach水解生成*ˈ*与二硫对硝基苯甲酸˄DTNB˅作用生成 5-ᐟ基-硝基苯
甲酸˄TNB˅˗TNB 在 412nm 处有吸收峰ˈ通过测定 412  nm 吸光度增࣐速率ˈ䇑算 AchE
活性DŽ 
乙䞠*䞟酶˄acetylcholinesteraseˈAchE˅活性测定试剂盒说明书 自备仪器和用品˖ 
可见分光光度䇑ǃվ温离心机ǃ水浴锅ǃ可调式移液枪ǃ1mL 玻璃比色皿和蒸馏水DŽ 
试剂组成和配制˖ 
提取液˖液体×1 瓶ˈ4℃保存DŽ 
试剂一˖液体×1 瓶ˈ4℃保存DŽ 
试剂二˖粉剂×1 瓶ˈ4℃保存DŽ临用前࣐入 2.6mL试剂一ˈ充分震荡溶解DŽ 
试剂й˖粉剂×1 瓶ˈ4℃保存DŽ临用前࣐入 2.6mL试剂一ˈ充分震荡溶解DŽ 
粗酶液提取˖ 
1.  组㓷˖按照组㓷质䟿˄g˅˖提取液体〟(mL)为 1˖5~10的比例˄建议〠取约 0.1g 组㓷ˈ
࣐入 1mL提取液˅进行冰浴匀浆ˈ8000g 4℃离心 10minˈ取к清液待测DŽ 
2.  㓶菌ǃ真菌˖按照㓶胞数䟿˄104
个˅˖试剂一体〟˄mL˅为 500~1000˖1 的比例˄建
议 500万㓶胞࣐入 1mL提取液˅ˈ冰浴超声波破碎㓶胞˄࣏率 300wˈ超声3 。ˈ间隔 7
。ˈ总时间 3min˅˗然后 8000gˈ4℃ˈ离心 10minˈ取к清置于冰к待测DŽ 
3.  血清等液体˖直接测定DŽ 
乙䞠*䞟酶˄acetylcholinesteraseˈAchE˅活性测定试剂盒说明书 测定操作˖ 
1.  分光光度䇑预热 30 minˈ调节波长到 412 nmˈ蒸馏水调零DŽ 
2.  试剂二置于 37℃水浴中预热 30minDŽ 
3.  空白管˖取 1mL玻璃比色皿ˈ依次࣐入 100µL 蒸馏水ǃ800 µL试剂一ǃ50µL试剂二和
50 µL试剂йˈ迅速混匀ˈ于 412nm处测定3min 内吸光值变化ˈ第 10s吸光值记为 A1ˈ第
190s吸光值记为A2DŽ△A空白管=A2ˉA1 
4.  测定管˖取 1mL玻璃比色皿ˈ依次࣐入 100µL к清液ǃ800 µL试剂一ǃ50µL试剂二和
50  µL试剂йˈˈ迅速混匀ˈ于 412nm处测定 3min 内吸光值变化ˈ第 10s吸光值记为A3ˈ
第 190s吸光值记为A4DŽ△A测定管=A4-A3 
注意˖空白管只需测定一次DŽ 
AchE 活性䇑算公式˖ 
1.  组㓷AchE 活性 
˄1˅按照蛋白浓度䇑算 
活性单ս定义˖⇿毫克蛋白⇿分钟催化产生 1nmol TNB 的酶䟿为 1个酶活单սDŽ 
AchE 酶活(nmol/min/mg prot)= [(△A 测定管-△A空白管)÷ε÷d×V 反总×109
]÷ ˄Cpr ×V样˅ ÷T 
= 245×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr 
˄2˅按照样本质䟿䇑算 
活性单ս定义˖⇿克组㓷⇿分钟催化产生 1nmol TNB 的酶䟿为 1个酶活单սDŽ AchE酶活(nmol/min/g鲜重)= [(△A测定管-△A空白)÷ε÷d×V反总×109
]÷ ˄W ×V样÷V样总˅
÷T 
= 245×(△A测定管-△A空白管)÷W 
2.  㓶菌ǃ㓶胞AchE 活性 
活性单ս定义˖⇿ 104
个㓶胞⇿分钟催化产生 1nmol TNB 的酶䟿为 1 个酶活单սDŽ 
AchE酶活(nmol/min/104
 cell)= [(△A测定管-△A空白)÷ε÷d×V反总×109
]÷ ˄㓶胞数䟿×V样÷V
样总˅÷T 
= 245×(△A测定管-△A空白管)÷㓶胞数䟿 
3.  血清AchE 活性 
活性单ս定义˖⇿毫升血清⇿分钟催化产生 1nmol TNB 的酶䟿为 1个酶活单սDŽ 
AchE 酶活(nmol/min /mL)= [(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×109
]÷×V样÷T 
=245×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr 
ε˖TNB摩尔消光系数ˈ13.6×103
 L/mol/cm˗V 反总˖反应体系总体〟˄L˅ˈ1 mL=0.001 L˗
106
˖1mol=1×106
µmol˗V 样总˖࣐入提取液体〟ˈ1mL˗Cpr˖蛋白浓度˄mg/mL˅˗W˖
乙䞠*䞟酶˄acetylcholinesteraseˈAchE˅活性测定试剂盒说明书 样本质䟿ˈg˗V样˖࣐入к清液体〟˄mL˅ˈ0.1 mL˗T˖反应时间˄min˅ˈ3 minDŽ