【产品名称】:小鼠25羟基*3(25(OH)D3/25HVD3)免疫组化试剂盒说明书

【英文名称】:Human hepatocyte growth factor,HGF ELISA kit
【说 明 书】:随货发送，也可直接在线销售索取
【测试种属】:犬、大小鼠、人、豚鼠、兔子、牛羊、猪、鸡鸭elisa试剂盒等种属
【检测目的】:用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
【保存及有效期】2-8℃,避光保存，6个月。
【产品产地】:进口/国产
【产品库存】:现货供应
【产品规格】:50T/100T
【品牌】:国产-雅吉生物自主研发/进口原装
【产品价格】:*，洽谈！
适用于科研实验、科学研究等领域，不得用于临床诊断.
产品特性:
灵敏度:0pg/mL 
检测范围:0pg/mL
性价比高:高质量，低价格
高效灵活:小鼠25羟基*3(25(OH)D3/25HVD3)免疫组化试剂盒说明书多个样品可同时分析，灵活确定分析试样的数量
特异性强:优选高度特异的配对抗体
操作简单:48孔/96孔预包被板的完整试剂，实验时间短.

标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
预期应用：ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量.
标准品的稀释：提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl， 然后再加待测样品 10µl（样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
温育：操作同 3。
洗涤：操作同 5。
显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 分钟.
终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。
检品溶液的制备：
取大黄粉末2克，加乙醇20ml，在沸水浴上回流浸提10分钟，过滤供鉴别用。
2．鉴别试验： 
编号 成 分  包装组成  GK500705 GK500710 
GK500711 A HRP标记聚合物(抗兔/鼠) 1×5ml 1×10ml 1×100ml 
B DAB缓冲稀释液 2×6.25ml 2×12.5ml 2×125ml 
C DAB原液 1×0.25ml 1×0.5ml 1×5ml 
配件  塑料吸管 2个 2个 2个 10ml刻度离心管  无  无  1个    
产品简介：小鼠25羟基*3(25(OH)D3/25HVD3)免疫组化试剂盒说明书是一个特别敏感的二步法免疫组化试剂盒，适合与兔抗抗体或小鼠抗抗体配用。其中试剂A是标记有辣根过氧化物酶和抗兔及抗小鼠免疫球蛋白的多聚体分子，相当于二抗，它与兔抗或小鼠抗一抗结合。结合后的大分子即标记有辣根过氧化物酶，再与DAB反应，得到棕色显色。由于该系统不含*和链亲和素，所以不受内源型*干扰。染色背景非常清晰。  该系统实验步骤少，省时；操作简单，背景低。

产品应用： 常规脱蜡水化：  将石蜡切片浸于二甲苯中5分钟，三次。取出切片置于100％无水乙醇中3分钟两次；依次置入90%－70%各级酒精各3分钟。用PBS或TBS冲洗3次，每次3分钟。

石蜡切片免疫组化实验操作步骤如下：

实验方法原理    根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子结合在多聚酶上形成多聚物分子,其与待检的抗原特异性的结合后，加入底物显色。
实验材料    石蜡切
试剂、试剂盒    PBS柠檬酸盐缓冲液蒸馏水增强剂酶标抗鼠 兔聚合物苏木素酒精二甲苯树胶盐酸二氨基联苯胺
仪器、耗材    烘箱微波盒塑料切片架显微镜胶头滴管
实验步骤    
1.  石蜡切片置于67℃烘箱中，烘片2小时，脱蜡至水，用pH7.4的PBS冲洗三次，每次3分钟（3×3’）。
 
2.  取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档微波处理10分钟，取出微波盒流水自然泠却，从缓冲液中取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS冲洗2×3’。（注：不是所有的抗体都需要微波修复的，视具体情况而定）
 
3.  每张切片加1滴3%H2O2，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3×3’。
 
4.  除去PBS液，每张切片加1滴相应的*抗体（相应稀释倍数），室温下孵育2小时。
 
5.  PBS冲洗3×5’。除去PBS液，每张切片加1滴聚合物增强剂，室温下孵育20分钟。PBS冲洗3×3’。
 
6.  除去PBS液，每张切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物，室温下孵育30分钟。PBS冲洗3×5’。
 
7.  除去PBS液，每张切片加1滴新鲜配制的DAB液（二氨基联苯胺），显微镜下观察5分钟。
 
8.  苏木素复染，0.1%HCl分化，自来水冲洗，蓝化，切片经梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固，晾干后观察。
收起 
    
一、特点

1.  在切片加上一抗后，第二抗体标记多聚螯合物酶（HRP）的复合物与一抗结合，在多聚螯合物上有大量的HRP分子，使抗原信号有显著的放大，其敏感性较SABC、SP法高。

2.  由于多聚物在体内不存在，又不使用*，从而避免了由于*引起的非特异性背景染色，背景比SABC、SP法清晰。

3.  辣根过氧化物酶与二抗结合在多聚物上，替代传统方法的 二抗、三抗，减少了实验步骤，且试剂孵育时间短，只需15分钟，使得免疫组化方法更简单，实验时间比SABC、SP法大为缩短。

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